[发明专利]一种蛋白质标签载体的构建及其表达与检测方法有效
| 申请号： | 201811418693.0 | 申请日： | 2018-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN109402153B | 公开（公告）日： | 2021-11-05 |
| 发明（设计）人： | 陈冬生;陶小倩;孙铭钟;吴华勤 | 申请（专利权）人： | 安徽师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/65 | 分类号： | C12N15/65;C12N15/85;A01K67/033;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京风雅颂专利代理有限公司 11403 | 代理人： | 杨红梅 |
| 地址： | 241000*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种蛋白质标签载体的构建及其表达与检测方法，涉及生物标记技术领域，本发明以果蝇卵巢生殖细胞特异性高表达的nos基因为实例，开发了一种细胞内源性的蛋白质标记技术，即基于末位外显子标记的蛋白质标签技术；首先，借助于分子克隆技术，构建nos基因最后一个外显子嵌合有GFP标签序列转基因载体；其次，借助于果蝇成熟的转基因技术，制备出携带此转基因载体的果蝇，通过检测其卵巢细胞内nos基因表达产物GFP荧光的表达与否，此技术为模式生物果蝇基因的表达模式研究提供了便利，为哺乳动物基因的表达及定位的研究提供借鉴。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白质 标签 载体 构建 及其 表达 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种蛋白质标签载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)果蝇nos基因3'UTR‑AS序列的扩增，得nos 3'UTR‑AS，且其碱基序列为SEQ ID NO.1；(2)pattB‑nosP‑3'UTR‑AS过渡载体的构建；(3)act5c基因ATG上游4550bp序列的扩增，得扩增前的碱基序列为SEQ ID NO.2；(4)pattB‑act5cP‑3'UTR‑AS过渡载体的构建；(5)nosE3D‑I3‑E4C和GFP序列的扩增，其中GFP的碱基序列为SEQ ID NO.3；(6)nosE3D‑I3‑E4C‑GFP序列的扩增；(7)pattB‑act5cP‑nosMLExon‑GFP载体的构建，其中nosMLExon的碱基序列为SEQ ID NO.4。
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