[发明专利]一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法

摘要

本发明公开了一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，通过在偶联于羧基胶乳表面的抗体两条重链间，增加一个氨基酸支架，来增加抗体两个Fab之间的空间距离，从而减小胶乳比浊过程中抗体与抗原结合的空间位阻，提高灵敏度；本发明对采用常规羧基胶乳偶联抗体后的试剂进行改进，放大工艺成熟，利于推广。

主权项

1.一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将双链单特异性抗体与羧基胶乳共价偶联，在封闭前的胶乳溶液中加入尿素，使胶乳溶液中尿素终浓度达到10‑20mM/L；37度恒温摇床，120rpm温和旋转混匀孵育1小时，获得胶乳试剂；(2)将中部酸性，两端含半胱氨酸的环肽的氨基酸支架，室温溶解于支架溶解液中；所述氨基酸支架的用量为：每mg抗体对应0.010‑0.020mg氨基酸支架；所述氨基酸支架序列如式Ⅰ所示，K为赖氨酸，C为半胱氨酸，X为3‑4个自由组合的酸性氨基酸；(3)对步骤(1)获得的胶乳试剂去除50％背景缓冲液，即换液50％，加入步骤(2)所述溶解有氨基酸支架的溶液，使每mg抗体对应0.010‑0.020mg氨基酸支架并混匀；向前述混合有氨基酸支架的胶乳试剂中滴加50mmol/L的过硫酸钾溶液，所述过硫酸钾的摩尔量为步骤(1)中尿素量的35‑50％；(4)将步骤(3)滴加了过硫酸钾溶液的胶乳试剂于37度恒温摇床，120rpm温和旋转混匀孵育30min；(5)将步骤(4)孵育后的胶乳试剂进行封闭并换液清洗去除残留氨基酸支架、尿素和过硫酸钾，制得成品试剂R2。