[发明专利]一种利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法在审
| 申请号： | 201811426609.X | 申请日： | 2018-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN109566606A | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 刘沛林;申晓辉;陈冠群 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | A01N3/00 | 分类号： | A01N3/00;A01G31/00 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 庄文莉 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法，为采用从百子莲中克隆到的基因，表达存化提取相应蛋白SPI(Serpin丝氨酸蛋白酶抑制剂)，此蛋白具有抗胁迫保护的作用，用此蛋白酶抑制剂的玻璃化溶液处理拟南芥幼苗以提高其保存效果，具体包括：预培养、装载液处理、玻璃化溶液处理和液氮保存步骤，其中所述玻璃化溶液含有0～25μL/mL SPI。本发明中公开的方法对植物超低温玻璃化保存效果优化显著，通过添加SPI蛋白作为外源物质对植物玻璃化超低温保存起到促进作用。 | ||
| 搜索关键词： | 蛋白酶抑制剂 玻璃化溶液 拟南芥幼苗 蛋白 玻璃化法 冻存 丝氨酸蛋白酶抑制剂 玻璃化保存 超低温保存 超低温 促进作用 外源物质 效果优化 液氮保存 百子莲 玻璃化 预培养 装载液 胁迫 克隆 保存 基因 | ||
【主权项】：
1.一种利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化超低温保存的方法对拟南芥幼苗进行保存，具体步骤如下：A、预培养：将拟南芥种子播在预培养基上，进行春化，然后光照培养；B、装载液处理：室温下，将步骤A处理后拟南芥幼苗放置在装载液中浸泡处理40～60分钟后去除装载液；C、玻璃化溶液处理：将步骤B处理后的拟南芥幼苗在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理40～60分钟；D、液氮保存：经步骤C处理后，保持拟南芥幼苗浸泡在玻璃化溶液中的状态，并将其置于液氮中保存；所述玻璃化溶液中添加0～25μL/mL的SPI；所述SPI的添加浓度不为0μL/mL。
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