[发明专利]一种基于微孔阵列芯片的单细胞基因检测方法有效
| 申请号： | 201811427223.0 | 申请日： | 2018-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN109536590B | 公开（公告）日： | 2021-10-29 |
| 发明（设计）人： | 贾春平;郜晚蕾;王艳敏;金鎏;周洪波;金庆辉;赵建龙 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 邓琪;余永莉 |
| 地址： | 200050 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供一种基于微孔阵列芯片的单细胞基因检测方法，包括以下步骤：1)提供一种包含若干微孔单元的微孔阵列芯片；2)将细胞悬液滴加于微孔阵列芯片上，通过离心实现单细胞在单个微孔单元中的定位；3)在微孔阵列芯片上粘贴PCR封装膜，进行第一次封装，离心，高温加热，揭掉PCR封装膜；4)在微孔阵列芯片上滴加PCR预混液，采用聚丙烯双面胶膜粘贴微孔阵列芯片，离心，将玻璃盖板与聚丙烯双面胶膜上层贴合，实现第二次封装；以及5)将第二次封装完成的微孔阵列芯片放置于PCR原位仪上进行PCR，反应结束后，显微镜下观察荧光信号，分析单细胞基因表达水平。根据本发明提供的方法实现了单细胞水平的高通量、一体化和快速检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 微孔 阵列 芯片 单细胞 基因 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于微孔阵列芯片的单细胞基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提供一种微孔阵列芯片，所述微孔阵列芯片由玻璃基底和聚甲基硅氧烷芯片键合而成，所述聚甲基硅氧烷芯片包括微孔阵列和包围在所述微孔阵列外侧的外围沟道，所述微孔阵列包含若干微孔单元；2)将细胞悬液滴加于所述微孔阵列芯片上，通过离心操作使细胞沉降于所述微孔阵列芯片的各个微孔中，实现单细胞在单个微孔单元中的定位；3)在所述微孔阵列芯片上粘贴PCR封装膜，进行第一次封装，通过离心操作甩掉多余的溶液，然后高温加热使细胞膜蛋白变性失活，揭掉PCR封装膜；4)在所述微孔阵列芯片上滴加PCR预混液，然后采用聚丙烯双面胶膜粘贴所述微孔阵列芯片，通过离心操作甩掉多余的溶液，然后再利用紫外光固化胶将玻璃盖板与所述微孔阵列芯片上的聚丙烯双面胶膜上层贴合，实现第二次封装；5)将第二次封装完成的微孔阵列芯片放置在PCR原位仪上进行PCR，反应结束后，显微镜下观察荧光信号，分析单细胞基因表达水平。
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