[发明专利]使用HPLC校正因子法测定尼可地尔片剂有关物质的方法

摘要

本发明涉及使用HPLC校正因子法测定尼可地尔片剂有关物质的方法。该方法照中国药典2015年版四部通则0512所载的高效液相色谱法中的规范进行测定，用C18色谱柱，用三氟乙酸‑三乙胺‑四氢呋喃‑水混合液为流动相测定，能够同时定量测定的杂质包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E及相关未知杂质，并具有优良的方法学性能，例如检测线性范围宽、线性良好、检出限和定量限小，精密度良好。

主权项

1.使用高效液相色谱法对尼可地尔片剂中的有关物质进行检测的方法，其包括以下操作：(1)照中国药典2015年版四部通则0512所载的高效液相色谱法中的规范进行测定；(2)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(例如，色谱柱的规格为150～300mm(例如250mm)×4.6mm，5μm)，以三氟乙酸‑三乙胺‑四氢呋喃‑水(3:5:3:989)为流动相A，以水：四氢呋喃：三乙胺：三氟乙酸(972:20:5:3)为流动相B，按下表所示梯度洗脱程序进行梯度洗脱，流速为1.2ml/min，柱温为25℃，检测波长为262nm，时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)0.01000221000540100650100661000751000系统适用性试验溶液色谱图中，尼可地尔的保留时间在33～40min范围内(例如34～38min)，理论板数按尼可地尔峰计应不低于5000，尼可地尔与相邻杂质峰之间的分离度应大于3；(3)溶液制备：取相当于尼可地尔20mg的尼可地尔片剂研成的细粉，精密称定，置10ml量瓶中，用稀释液振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为有关物质检查用的供试品溶液(其浓度相当于2000μg/ml)；取尼可地尔对照品20mg，精密称定，置10ml量瓶中，用上述稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度相当于2000μg/ml的对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，用上述稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(其浓度相当于20μg/ml)；杂质溶液：精密称取各杂质10mg，分别置10ml量瓶中，用上述稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成各杂质浓度相当于1000μg/ml的贮备液；分别精密量取各杂质贮备液1ml，置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为各杂质溶液(其浓度相当于10μg/ml)；系统适用性试验溶液：取尼可地尔对照品20mg，精密称定，置10ml量瓶中，另外向该量瓶中分别精密加入各杂质储备液0.1ml，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液(其浓度相当于尼可地尔2000μg/ml、各杂质10μg/ml)；(4)测定：精密量取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，读取色谱图中尼可地尔的保留时间、峰面积；精密量取各个杂质溶液10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，读取色谱图中各个杂质的保留时间、峰面积，并确定各个杂质的保留时间；精密量取系统适用性试验溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，读取色谱图中各个色谱峰的保留时间、峰面积，计算尼可地尔峰的理论板数、尼可地尔与相邻杂质峰之间的分离度，计算各杂质相对于尼可地尔的相对保留时间；精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，读取色谱图中尼可地尔及各杂质的面积；供试品溶液色谱图中如有已知杂质峰，以对照品溶液中尼可地尔峰面积为对照，用该杂质峰面积乘以其校正因子后按外标法计算该杂质在片剂中的含量。