[发明专利]一种发根农杆菌诱导的大豆发状根与大豆花叶病毒病害系统的方法及其应用

摘要

本发明公开了一种发根农杆菌诱导的大豆发状根与大豆花叶病毒(ARISHR‑SMV)病害系统的方法及其应用，该方法包括以下步骤(1)利用发根农杆菌侵染大豆子叶诱导愈伤组织；(2)提纯大豆花叶病毒(SMV)；(3)大豆愈伤组织接种纯化的SMV粒子；(4)大豆发状根中SMV含量检测。本发明的方法成功应用到9个SMV株系，可快速、有效的鉴定SMV相关基因的功能，为分子标记辅助育种或转基因育种提供功能标记或基因，具有较大应用潜力，另外，本发明的方法还可以应用在大豆种质对SMV的抗性鉴定。

主权项

1.一种发根农杆菌诱导的大豆发状根与大豆花叶病毒病害系统的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)利用发根农杆菌侵染大豆子叶诱导愈伤组织：1)发根农杆菌准备：取发根农杆菌甘油菌进行菌液培养；2)大豆子叶外植体准备：将成熟、无破损的大豆种子盛于培养皿中，灭菌，除菌的大豆种子去除种皮培养，收割大豆子叶用于发根农杆菌侵染；3)发根农杆菌侵染大豆子叶：在大豆子叶背部近叶柄处切下切口，发根农杆菌滴加到子叶创伤处并进行暗培养，从创伤处长出的愈伤组织被用于SMV接种；(2)提纯大豆花叶病毒SMV：1)SMV在防虫温室内繁殖，繁殖寄主为大豆，在第一对真叶展开后接种，发病后2‑3周内摘取病叶，进行SMV提纯；2)将收集的新鲜病叶加入缓冲液，研磨成匀浆，过滤并收集滤液；离心取上清，静置过夜；多次离心并悬浮，获得SMV病毒粒子备用；(3)大豆愈伤组织接种纯化的SMV粒子：将步骤(1)中发根农杆菌诱导的大豆愈伤组织刺伤，于创伤处滴加SMV病毒粒子，继续培养；(4)大豆发状根中SMV含量检测：将从愈伤组织长出的大豆发状根切割回收，对大豆发状根中SMV含量进行检测。