[发明专利]杨树次生木质部原生质体环状RNA过表达体系的构建方法及应用有效
申请号: | 201811459774.5 | 申请日: | 2018-11-30 |
公开(公告)号: | CN109486855B | 公开(公告)日: | 2021-10-29 |
发明(设计)人: | 顾连峰;刘旭庆;高宇帮;王慧慧;王永生;席飞虎;张泽宇;徐锡;张航晓;赵良真 | 申请(专利权)人: | 福建农林大学 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82 |
代理公司: | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人: | 蔡学俊 |
地址: | 350002 福*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | 本发明公开了一种杨树次生木质部原生质体环状RNA过表达体系的构建方法及应用,属于基因工程技术领域。其构建方法包括以下步骤:环状RNA的分子生物学验证;环状RNA过表达重组质粒的构建;PEG介导重组质粒转化杨树原生质体;已转化重组质粒原生质体中的环状RNA过表达情况的分子生物学检测。该过表达体系能够被应用于宿主基因转录后表达情况的调控。 | ||
搜索关键词: | 杨树 次生 木质部 原生 质体 环状 rna 表达 体系 构建 方法 应用 | ||
【主权项】:
1.一种杨树次生木质部原生质体环状RNA过表达体系的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)环状RNA的分子生物学验证:依据转录组测序所得环状RNA基因序列,设计相应环状RNA基因的“背靠背”引物,PCR扩增、测序,实验验证环状RNA基因的真实性;(2)环状RNA过表达重组质粒的构建:PCR克隆杨树环状RNA宿主基因片段,PCR克隆所得环状RNA宿主基因部分序列为目的片段,使用Gateway方法构建环状RNA过表达重组质粒;(3)PEG介导环状RNA过表达重组质粒转化杨树次生木质部原生质体;(4)已转化重组质粒原生质体中的环状RNA过表达情况的分子生物学检测。
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