[发明专利]一种诱导海洋放线菌沉默基因表达产生新物质的方法

摘要

本发明属于基因诱导技术领域，公开了一种诱导海洋放线菌沉默基因表达产生新物质的方法；以无菌陈海水冲洗紫海胆，用无菌水洗3遍后取其肠道组织置于无菌水中，稀释，吸取200μL，涂布在含有50μg/mL重铬酸钾和20μg/mL卡那霉素的高氏培养基平板上，得到放线菌菌株；对菌株进行小规模发酵，采用平板滤纸片法筛选出2株菌株发酵液的乙酸乙酯粗提物，并进行活性筛选；检测诱导后的菌株产生新次级代谢产物。本发明首次采用物理与化学方法来诱导海洋放线菌沉默基因表达产生新物质，并利用谱学测试和活性评价相结合建立诱导和识别海洋放线菌产新物质的方法。

主权项

1.一种诱导海洋放线菌沉默基因表达产生新物质的方法，其特征在于，所述诱导海洋放线菌沉默基因表达产生新物质的方法为：步骤一：以无菌陈海水冲洗紫海胆，经75％酒精消毒后，用无菌水洗3遍后取其肠道组织置于无菌水中，稀释，吸取200μL，涂布在含有50μg/mL重铬酸钾和20μg/mL卡那霉素的高氏培养基平板上，28℃培养15天，挑取单菌落划线接种至ISP2培养基平板上，经3次单菌落划线纯化即得到放线菌菌株；步骤二：利用液体高氏培养基和麦芽提取物培养基小规模发酵1L所纯化的放线菌，过滤发酵液得到菌液和菌体，将菌液浓缩后用乙酸乙酯提取，菌体用氯仿甲醇浸提，浓缩后得到的提取物供抗病原菌活性筛选；步骤三：采用平板滤纸片法筛选出2株菌株发酵液的乙酸乙酯粗提物，利用以上培养基并通过优化培养条件和添加诱导物小规模发酵上述2株活性菌株，过滤除去菌体，用乙酸乙酯萃取发酵液，得粗提物，并进行活性筛选；步骤四：利用ODS C‑18反相柱处理诱导后和诱导前的发酵粗提物，进行HPLC‑MS‑UV分析，结合其氢谱分析，检测诱导后的菌株产生新次级代谢产物。