[发明专利]基于N-烷基化法的多种氨基代谢物同步定量分析方法在审
| 申请号： | 201811485237.8 | 申请日： | 2018-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN109580814A | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 唐惠儒;彭叶青;薛海斯 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陆飞;陆尤 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于代谢组学及生命分析化学技术领域，具体为基于N‑烷基化法的多种氨基代谢物同步定量分析方法。本发明步骤包括：氨基代谢物标准溶液的配制；氨基代谢物的烷基化反应；采用UHPLC‑MS/MS对多种烷基化氨基代谢物的定量检测分析。本发明采用还原胺化法，利用NaBH3CN/NaBD3CN和五种醛（乙醛，丙醛，丁醛，戊醛和己醛）对代谢物的氨基烷基化（乙基化，丙基化，丁基化，戊基化，己基化）修饰，不仅改善了氨基代谢物在色谱反相柱上保留，提高其质谱离子化效率，还可实现更为精准的同位素内标定量测量。本发明衍生化条件温和、反应效率高、易于淬灭且后处理简单，具有较高检测灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 代谢物 氨基 定量分析 分析化学技术 高检测灵敏度 氨基烷基化 离子化效率 烷基化氨基 烷基化反应 后处理 乙醛 标准溶液 代谢组学 定量检测 反应效率 还原胺化 烷基化法 同位素 丁基化 反相柱 量测量 衍生化 乙基化 标定 丙基 丙醛 淬灭 丁醛 己基 己醛 色谱 戊基 戊醛 修饰 质谱 配制 保留 分析 | ||
【主权项】：
1.基于N‑烷基化法的多种氨基代谢物同步定量分析方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）氨基代谢物标准溶液的配制：取氨基代谢物，用体积比50‑70%的甲醇水溶液配制成浓度为10‑600μM的标准溶液；（2）氨基代谢物的衍生化反应：在含N‑乙基马来酰亚胺（NEM）的磷酸缓冲液中，加入氨基代谢物标准溶液，20‑30℃反应1‑20min；然后加入4‑叔丁基苯硫酚（tBBT），20‑30℃反应至少2 min，再加入含三(2‑羧乙基)膦（TCEP）和抗坏血酸（Vc）的醋酸缓冲液，涡旋混匀至少10min；再加入NaBH3CN或者NaBD3CN，涡旋混匀；再加入醛溶液，25‑37℃反应12‑24h；然后用盐酸调节反应液pH至2‑3，淬灭反应，稀释后加入内标；（3）烷基化氨基代谢物的检测：采用UHPLC‑MS/MS进行测定。
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