[发明专利]一种基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺

摘要

一种基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，包括如下步骤：A、冬虫夏草菌种子培养得到种子液；B、种子液经液体发酵得到冬虫夏草菌丝体发酵液；C、冬虫夏草菌丝体发酵液粉碎8‑15min得到冬虫夏草混合液；D、冬虫夏草混合液提取浓缩得到多糖浓缩液；E、多糖浓缩液离心沉淀烘干得到冬虫夏草多糖提取物；F、冬虫夏草多糖提取物上AB‑8型大孔吸附树脂柱，洗脱，并收集洗脱液；G、洗脱液，上D‑280大孔吸附树脂柱，脱色浓缩干燥得到冬虫夏草多糖。本发明的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，实现了培养、提取、纯化连续处理，提取效率高，冬虫夏草多糖产率高、纯度高，操作过程较简单，成本较低。

主权项

1.一种基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：包括如下步骤：A、将冬虫夏草菌接种到冬虫夏草种子培养基上，放进摇床培养箱，培养3‑4d，得到种子液；B、将步骤A得到的种子液，接种到经灭菌处理的冬虫夏草液体培养基上，接种量为6‑9％，放进恒温恒湿培养箱中，在28.5℃温度条件下，发酵5‑8天，得到冬虫夏草菌丝体发酵液；C、将步骤B得到的冬虫夏草菌丝体发酵液放入破壁机中，加入2‑4倍质量的蒸馏水，粉碎8‑15min，得到冬虫夏草混合液；D、将步骤C得到的冬虫夏草混合液，超声波处理40‑50min，在70‑75℃下回流提取4‑5h，提取液过滤后浓缩，得到多糖浓缩液；E、在步骤D得到的多糖浓缩液中加入3‑4.5倍体积的无水乙醇，搅拌后冷却至4℃，静置18‑30小时，进行离心处理，并将沉淀烘干得到冬虫夏草多糖提取物；F、用蒸馏水充分淋洗AB‑8型大孔吸附树脂和D‑280型大孔吸附树脂大孔吸附树脂，用含氨质量分数为8‑14g/kg的乙醇溶液浸泡2‑3h，去掉树脂表面和孔道内残留的溶剂和活性树脂，用去离子水洗至中性，无醇味，采用湿法装柱，将树脂慢慢装入直径10cm的玻璃柱中，树脂高约150cm；将步骤E得到的冬虫夏草多糖提取物加蒸馏水溶解，上AB‑8型大孔吸附树脂柱，进行反复洗脱，并收集洗脱液；G、将步骤F得到的洗脱液，上D‑280大孔吸附树脂柱，进行脱色，脱色后，真空浓缩，真空干燥，得到冬虫夏草多糖；其中，步骤A中每kg所述冬虫夏草种子培养基的组成为：葡糖糖25‑35g、酵母膏1.8‑2.2g、土豆粉185‑195g、蚕蛹粉12‑15g、酸水解酪蛋白1.2‑1.4g、磷酸二氢钾1.5‑1.8g、硫酸镁0.9‑1.2g、其余为蒸馏水；步骤B中每kg所述冬虫夏草液体培养基的组成为：玉米粉20‑25g、小米粉9‑12g、土豆粉7‑9g、葡糖糖38‑48g、磷酸二氢钾2.1‑3.5g、酸水解酪蛋白2.8‑3.5g、硫酸镁0.9‑1.3g、其余为蒸馏水。