[发明专利]一种利用地衣芽孢杆菌工程菌株发酵生产乙偶姻的方法有效
| 申请号： | 201811497781.4 | 申请日： | 2018-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN109486871B | 公开（公告）日： | 2021-10-26 |
| 发明（设计）人： | 高超;马翠卿;严金鑫;刘秋媛;张一鹏 | 申请（专利权）人： | 山东大学深圳研究院;山东大学 |
| 主分类号： | C12P7/26 | 分类号： | C12P7/26;C12N1/21;C12R1/10 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 518057 广东省深圳市南山区高新*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用地衣芽孢杆菌工程菌株发酵生产乙偶姻的方法，是以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10‑1‑A为出发菌敲除其甘油脱氢酶gdh基因和2,3‑丁二醇脱氢酶基因budC并且以来自Thermococcus profundus DT5432中NADH氧化酶基因nox来替换乳酸脱氢酶基因ldh构建出能用于生产乙偶姻的地衣芽孢杆菌工程菌株，然后以葡萄糖为底物，生物发酵该菌，由发酵液得到乙偶姻。实验证实本发明的工程菌可生产82.14克/升的乙偶姻，生产效率达到2.28克/升/小时，且该生产过程成本低，产量高，具有很好的应用价值和可观的经济效益。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 地衣 芽孢 杆菌 工程 菌株 发酵 生产 乙偶姻 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用地衣芽孢杆菌工程菌株发酵生产乙偶姻的方法，步骤是：(1)以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10‑1‑A为出发菌，敲除地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10‑1‑A甘油脱氢酶gdh基因和2,3‑丁二醇脱氢酶基因budC并且以来自Thermococcus profundus DT5432中NADH氧化酶基因nox来替换乳酸脱氢酶基因ldh构建出能用于生产乙偶姻的地衣芽孢杆菌工程菌株，该工程菌株命名为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis ΔgdhΔbudCΔldh::nox；其中，所述出发菌株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10‑1‑A已于2011年11月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.5461；(2)以葡萄糖为底物，生物发酵地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis ΔgdhΔbudCΔldh::nox，由发酵液得到乙偶姻；其中，所述发酵条件是：培养温度为50±1℃，培养方式为搅拌培养，搅拌转速为500±50转/分钟，旋转半径为33±1毫米，通气量为1.0±0.1vvm，培养时间为18～36小时；发酵培养基组成为：葡萄糖50～80克/升，酵母粉12克/升，无水乙酸钠6.5克/升，柠檬酸铵1克/升，磷酸氢二钾2克/升，七水硫酸镁0.25克/升，金属离子母液10毫升/升，余量为水；pH为7.0；其中的金属离子母液配方是：硫酸亚铁2.25克/升，硫酸锌0.75克/升，硫酸锰0.38克/升。
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