[发明专利]一种鸡血藤悬浮细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种鸡血藤悬浮细胞的培养方法，包括：步骤1)选取鸡血藤种子，消毒，放置于萌发液体培养基中进行萌发培养至其长出嫩叶；步骤2)选取嫩叶作为外植体，将其置于诱导固体培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织；步骤3)将愈伤组织在继代固体培养基中进行继代培养至少二次，至其生长成为淡绿色的颗粒状的疏松的细胞团；步骤4)将细胞团转移至启动液体培养基中进行悬浮启动培养，获得悬浮细胞系；步骤5)将悬浮细胞系接种至增殖液体培养基中进行增殖培养，获得鸡血藤悬浮细胞系。本发明每升鸡血藤悬浮细胞中可提取到1.5～2g多糖。

主权项

1.一种鸡血藤悬浮细胞的培养方法，其特征在于，包括：步骤1)首先选取鸡血藤种子，然后对所述种子进行消毒，最后将其放置于萌发液体培养基中进行萌发培养至其长出1～10mm长度的嫩叶，所述萌发液体培养基包含：1/4～1/2MS、蔗糖7～15g/L和6‑BA 0.1～0.3mg/L，其初始pH值为5.8；步骤2)选取经过萌发培养长出的嫩叶作为外植体，将所述外植体置于诱导固体培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织，所述诱导固体培养基包含：MS，6‑BA 0.2～0.5mg/L，NAA 0.02～0.1mg/L，蔗糖10～15g/L、蜂胶5～10g/L、酵母提取物2～5g/L、质量分数2～10％的银杏叶汁液和琼脂8g/L；步骤3)将所述愈伤组织在继代固体培养基中进行继代培养至少二次，至其生长成为淡绿色的颗粒状的疏松的细胞团，所述继代固体培养基包含：MS，6‑BA 0.5～1mg/L，NAA 0.02～0.1mg/L，蔗糖5～10g/L、蜂胶15～20g/L、酵母提取物5～10g/L、质量分数5～15％的银杏叶汁液和琼脂8g/L；步骤4)将所述细胞团转移至启动液体培养基中进行悬浮启动培养，获得悬浮细胞系，所述启动液体培养基包含：1/4～1/2MS、6‑BA 0.2～0.6mg/L，NAA 0.02～0.1mg/L、蔗糖2～5g/L、蜂胶10～15g/L、酵母提取物2～5g/L和质量分数2～10％的银杏叶汁液；步骤5)将所述悬浮细胞系接种至增殖液体培养基中进行增殖培养，获得鸡血藤悬浮细胞系，所述增殖液体培养基包含：1/2MS、6‑BA 0.5～1mg/L，NAA 0.02～0.1mg/L、蔗糖2～5g/L、蜂胶10～15g/L、酵母提取物2～5g/L和质量分数2～10％的银杏叶汁液。