[发明专利]利用生物反应器生产轮状病毒的方法

摘要

本发明申请涉及轮状病毒的生产方法，尤其是利用潮汐式生物反应器生产轮状病毒的方法，包括Vero细胞的培养和病毒接种和培养，为适应潮汐式生物器的需要，生长液和维持液的配方添加了葡萄糖，潮汐式生物反应器系统原则上与转瓶系统非常的相似，它也是交替的将细胞暴露于空气与营养物质中，然而潮汐式的运动克服了转瓶系统的很多缺点，如劳动力和空间需求以及污染风险。

主权项

1.一种利用生物反应器生产轮状病毒的方法，包括Vero细胞的培养以及病毒接种和培养，其特征在于步骤如下：步骤1、Vero细胞的培养，将潮汐培养反应器置于二氧化碳培养箱中并将参数调整细胞的接种参数为Up: 2 mm/sec T_H: 20 sec Down: 2 mm/sec B_H: 0 sec ，将回温到37 ℃±0.5℃的 450 ml 细胞生长液倒入体积为500ml的潮汐培养瓶中，然后将细胞分洒在潮汐培养瓶的载体上，培养5小时，然后进行截留率计算，并调整细胞培养参数；Vero细胞培养后的72小时进行一次换液，第72小时起，每24小时测量培养液的葡萄糖浓度一次，接近或低于 1 g/L则更换培养液；在整个Vero细胞培养阶段，每2‑3天进行载体片取样计数细胞，待细胞数目到达3 x 109个，停止Vero细胞培养；步骤2、病毒接种和培养，在步骤1培养Vero细胞的潮汐培养瓶中加入20ug/ml胰酶和600ug/mlCaCl2 ，37℃孵育45min；然后用500ml维持液将潮汐培养瓶中的细胞洗1次，；将病毒以MOI0.05接种于潮汐培养瓶，拧紧瓶盖，将瓶子于37℃倒置培养2h；补加维持液至潮汐培养瓶内总的溶液的量为500ml，于37℃培养96小时收液，‑20℃冻融一次，8000prm离心20min，去上清，‑80℃保存，蚀斑检测病毒滴度。