[发明专利]一种快速繁殖大花蕙兰组织培养方法

摘要

本发明公开了一种快速繁殖大花蕙兰组织培养方法，所述方法以大花蕙兰花瓣作为外植体，消毒时以磷酸盐缓冲液浸泡处理，以含葡萄汁及鱼油的WPN培养基进行拟原球茎诱导，在特定含卵磷脂的DKW培养基中进行增殖，接着在特定B5培养基中二次生根培养，经炼苗移栽获得种植苗，该方法诱导率高、增殖倍数高、培育时间短、且种植苗生长健壮、色泽翠绿。

主权项

1.一种快速繁殖大花蕙兰组织培养方法，其特征在于包含以下步骤：(1)外植体消毒：取开花第1～2天的大花蕙兰花瓣，无菌水流动冲洗15min，用pH为7.0的磷酸盐缓冲液浸泡30min，然后用75％酒精擦拭30s，再用0.1％HgCl2浸泡4～5min，无菌水流动冲洗20min，吸干水分，切成0.6～0.8cm的段；(2)拟原球茎诱导：将步骤(1)所得外植体接种到第一培养基，所述培养基组成为：WPN基本培养基、6‑BA0.5mg/L、NAA1.0mg/L、葡萄汁5g/L、鱼油5g/L，培养30～40天，得到原球茎；(3)增殖培养：将步骤(2)所得原球茎切分后，接种于第二培养基，所述培养基组成为：DKW基本培养基、TDZ3.0mg/L、活性炭1.0g/L、卵磷脂3g/L，培养50～60天，得到增殖后的原球茎；(4)生根培养：将步骤(3)增殖后的原球茎转入第三培养基，所述第三培养基组成为：B5基本培养基、NAA2.5mg/L、琼脂8g/L、6‑BA2mg/L，培养15～20天后，再次转入第三培养基，培养25～35天，得到生根苗；(5)炼苗移栽：将步骤(4)获得的生根苗移栽到栽培基质中，驯化2周，炼苗缓苗后正常培养。