[发明专利]一种供药学应用的蛋白酶变体

摘要

本发明公开了一种供药学应用的蛋白酶变体，涉及生物工程技术技术领域，其包含序列表中的SEQ ID NO.1氨基酸序列，所述氨基酸序列去除原基因N端前25个氨基酸酶原激活肽段中的前20个氨基酸，N端激活肽剩余序列为肠激酶识别位点。该供药学应用的蛋白酶变体，以及以糖基化识别序列Asn‑Xaa‑Ser/Thr为模板，选取距离活性位点氨基酸Asp89较近的82位Asn作为拟糖基化位点，直接采用双酶切并插入pPIC9K相应的单克隆位点进行标记酶切，从而在根本上提高了蛋白酶变体在氨基酸层面的酶切处理效率，副产物更少，使之在药学上经过适配性连接之后的应用更加广泛，并且使得所得蛋白酶变体的适应性更高。

主权项

1.一种供药学应用的蛋白酶变体，其包含序列表中的SEQ ID NO.1氨基酸序列，所述氨基酸序列去除原基因N端前25个氨基酸酶原激活肽段中的前20个氨基酸，N端激活肽剩余序列为肠激酶识别位点，缩短后的酶原序列经EcoRI和NotI双酶切并插入pPIC9K相应的单克隆位点；所述蛋白酶作为起始分子，通过片段化、缺失诱变、插入诱变、或取代诱变而得，并且包含在至少50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、265或266个连续相连氨基酸的长度上相应于所述起始分子的氨基酸序列，其中所述起始分子中含有的氨基酸取代R99E或R99D与氨基酸取代S3T、V4I和V199I的组合依然存在，所述蛋白酶的降解由20S核心颗粒中的β亚基进行，其机制被认为是苏氨酸依赖的亲核攻击，这一机制可能需要有一个结合的水分子参与活性的苏氨酸上羟基的去质子化，降解发生在核心颗粒中间的两个β环内的孔道里，一般不生成部分降解的产物，而是将底物蛋白完全降解为长度一定的肽段，肽段的长度一般为7‑9个残基。