[发明专利]一种产磷脂酶D的重组枯草芽孢杆菌及其应用在审
| 申请号： | 201811524674.6 | 申请日： | 2018-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN109456929A | 公开（公告）日： | 2019-03-12 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;李江华;黄婷婷;堵国成;陈坚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12N9/16;C12P13/06;C12P19/44;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种产磷脂酶D的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于酶工程领域。本发明是以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WB600)作为表达宿主，通过表达来源于链霉菌(Streptomyces racemochromogenes)的磷脂酶D编码基因(PLD)，得到了产磷脂酶D的枯草芽孢杆菌基因工程菌，在前期构建质粒的基础上在250mL摇瓶上通过启动子优化，成功使酶活从26.3U/mL，提高到34.7U/mL，并将发酵周期缩短到了24h。通过质粒稳定性检测，在传代5次后，质粒持有率依然达到100％，在200L罐上放大生产，酶活比摇瓶培养提高近5倍，达到171.5U/mL，可用于磷脂酶的工业化生产及转酯产物磷酯酰丝氨酸的生成。 | ||
| 搜索关键词： | 磷脂酶D 重组枯草芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 酶活 传代 磷酯酰丝氨酸 基因工程菌 质粒稳定性 编码基因 表达宿主 发酵周期 放大生产 构建质粒 摇瓶培养 链霉菌 磷脂酶 酶工程 启动子 可用 摇瓶 质粒 转酯 应用 检测 优化 成功 | ||
【主权项】：
1.一种产磷脂酶D的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，将如下DNA片段融合后表达：SpoVG启动子、RBS及spacer区amyE信号肽、与来源于链霉菌(Streptomyces racemochromogenes)10‑3的磷脂酶D基因；所述SpoVG启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述RBS及spacer区的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述amyE信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
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