[发明专利]一种烟叶中玉米素核苷液液萃取-液相色谱-串联质谱的测定方法

摘要

一种烟叶中玉米素核苷液液萃取－液相色谱－串联质谱的测定方法，包括以下步骤：以甲醇：水：甲酸溶液(80：19.9：0.1，V/V/V)作为浸提液，烟叶样品经低温浸提后，浸提液加入乙酸乙酯低温超声萃取，萃取液低温离心后，取上层有机相清液，低温氮吹近干，甲醇复溶后经有机滤膜过滤，采用液相色谱－串联质谱联用法测定烟叶中的玉米素核苷，内标法定量。本发明的特点是：采用同位素稀释内标法定量避免了分析过程中基质效应的影响；本方法前处理简单，可快速、准确检测烟叶中玉米素核苷的含量，且重复性和回收率好，适用于大批量样品的分析。

主权项

1.一种烟叶中玉米素核苷液液萃取－液相色谱－串联质谱的测定方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)提取液的制备：使用甲醇、水和甲酸，配制甲醇：水：甲酸溶液(80：19.9：0.1，V/V/V)作为提取液；(2)内标储备液配制：用甲醇配制氘代玉米素核苷(d2－ZR)内标储备液，浓度为1000ng/mL；(3)标准储备液配制：用甲醇配制玉米素核苷(ZR)标准储备液，浓度为100μg/mL；(4)样品前处理及分析：新鲜烟叶样品在液氮下研磨后储存于－50℃冰箱中备用；称取处理后的新鲜烟叶样品于2mL离心管中，加入内标储备液(1000ng/mL)及提取液(甲醇：水：甲酸＝80：19.9：0.1，V/V/V)，低温浸提，后加入萃取剂低温超声萃取，萃取液经过离心后，移取上层清液约900μL，氮吹浓缩至近干，用甲醇复溶，复溶液过有机膜后，样品试液进行LC－MS/MS测定；(5)标准曲线的绘制：用空白样品液稀释标准储备液配成系列浓度为1、5、10、20、50、100、200ng/mL的7级工作标准溶液；ZR及d2－ZR采用正离子模式，对上述系列标准溶液进行LC－MS/MS分析，以目标物与内标的峰面积比值对二者相应的浓度比值进行线性回归分析，求得玉米素核苷的标准曲线；(6)数据处理与检测：由目标峰面积与内标峰面积之比进行内标法定量。