[发明专利]一种产β-胡萝卜素的重组菌及利用Crispr-Cas9技术构建的方法在审
| 申请号： | 201811543192.5 | 申请日： | 2018-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN109666596A | 公开（公告）日： | 2019-04-23 |
| 发明（设计）人： | 刘梁;孟永宏;屈玉玲;杨凡;钱亚丹 | 申请（专利权）人： | 陕西师范大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/90;C12P23/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 西安永生专利代理有限责任公司 61201 | 代理人： | 高雪霞 |
| 地址： | 710062 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种产β‑胡萝卜素的重组菌及利用Crispr‑Cas9技术构建的方法，在解脂亚罗酵母中敲除ku70基因，然后将来源于三孢布拉霉的八氢番茄红素合成酶/番茄红素环化酶(carRA)、八氢番茄红素脱氢酶(carB)，来源于解脂亚罗酵母的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGS1)、3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶(tHMG)基因以snf为靶点整合至敲除ku70基因的解脂亚罗酵母基因组中；再利用Crispr‑Cas9技术调控carRA、carB、GGS1、tHMG的拷贝数，构建高产β‑胡萝卜素的重组菌株。本发明重组菌经发酵培养，并提取分离，β‑胡萝卜素含量可以达到35mg/g细胞干重，且菌株稳定性强。 | ||
| 搜索关键词： | 胡萝卜素 解脂亚罗酵母 重组菌 技术构建 牛儿基 敲除 基因 八氢番茄红素合成酶 八氢番茄红素脱氢酶 甲基戊二酰辅酶A 番茄红素环化酶 焦磷酸合成酶 菌株稳定性 三孢布拉霉 发酵培养 技术调控 提取分离 重组菌株 还原酶 基因组 拷贝数 再利用 靶点 干重 构建 整合 羟基 高产 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种利用Crispr‑Cas9技术构建产β‑胡萝卜素的重组菌的方法，其特征在于：在解脂亚罗酵母中敲除ku70基因，然后将来源于三孢布拉霉的β‑胡萝卜素合成通路关键基因carRA、carB和解脂亚罗酵母内源基因GGS1、tHMG以snf为靶点整合至敲除ku70基因的解脂亚罗酵母基因组中，再利用Crispr‑Cas9技术调控carRA、carB、GGS1、tHMG的拷贝数，构建成产β‑胡萝卜素的重组菌。
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