[发明专利]牛PLIN2互作蛋白双分子荧光互补载体的构建方法在审
申请号: | 201811547741.6 | 申请日: | 2018-12-18 |
公开(公告)号: | CN109679995A | 公开(公告)日: | 2019-04-26 |
发明(设计)人: | 李佩韦;张薇依;昝林森 | 申请(专利权)人: | 西北农林科技大学 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N15/12 |
代理公司: | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人: | 李郑建 |
地址: | 712100 陕*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | 本发明涉及一种牛PLIN2互作蛋白双分子荧光互补载体的构建方法,以牛PLIN2的CDs区全长氨基酸序列,通过设计PLIN2在双分子荧光互补VN‑173载体上的引物,与pBiFC‑VN173载体重组来构建目的蛋白表达载体,酶切位点选择EcoRI和XbaI酶切,反应温度为37℃,并在EcoRI位点后增加一个碱基A,防止移码突变,最终得到牛PLIN2互作蛋白双分子荧光互补载体pBiFC‑VN173‑PLIN2。与现有研究蛋白互作方法相比,可以更高效表达并避免假阴性结果的存在。同时,也为进一步研究及构建蛋白互作网络及提高蛋白互作理论的完整性提供一定的试验验证手段。 | ||
搜索关键词: | 蛋白 分子荧光 构建 互补载体 全长氨基酸序列 假阴性结果 表达载体 高效表达 酶切位点 目的蛋白 移码突变 载体重组 碱基A 位点 引物 验证 研究 试验 网络 | ||
【主权项】:
1.一种牛PLIN2互作蛋白双分子荧光互补载体的构建方法,其特征在于,该方法以牛PLIN2的CDs区全长氨基酸序列,通过设计PLIN2在双分子荧光互补VN‑173载体上的引物,与pBiFC‑VN173载体重组来构建目的蛋白表达载体,酶切位点选择EcoRI和XbaI酶切,反应温度为37℃,并在EcoRI位点后增加一个碱基A,防止移码突变,最终得到牛PLIN2互作蛋白双分子荧光互补载体pBiFC‑VN173‑PLIN2。
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