[发明专利]一种基于适配体与滚环扩增的外泌体检测方法在审
| 申请号： | 201811548979.0 | 申请日： | 2018-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN109655512A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 李智洋;何农跃;黄蓉蓉 | 申请（专利权）人： | 南京鼓楼医院 |
| 主分类号： | G01N27/327 | 分类号： | G01N27/327 |
| 代理公司： | 南京钟山专利代理有限公司 32252 | 代理人： | 蒋厦 |
| 地址： | 210008 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于适配体与滚环扩增的外泌体检测方法，应用电化学传感器的方法构建出基于外泌体特异性的适配体探针，利用G‑四联体‑Hemin模拟过氧化酶催化H2O2反应产生信号，并结合滚环扩增合成大量G‑四联体进行信号放大，实现外泌体的定量检测，并用于实际血清样本的检测。本发明应用电化学传感器的方法构建出基于外泌体特异性的适配体探针，利用G‑四联体‑Hemin模拟过氧化酶催化过氧化氢产生信号，并结合滚环扩增合成大量G‑四联体进行信号放大，极大的提高了外泌体的检测灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 滚环扩增 适配体 联体 应用电化学 产生信号 过氧化酶 传感器 构建 探针 检测 合成 催化过氧化氢 检测灵敏度 定量检测 血清样本 催化 | ||
【主权项】：
1.一种基于适配体与滚环扩增的外泌体检测方法，其特征在于：包括如下步骤：1)制备修饰外泌体膜蛋白特异性抗体的金电极，利用BSA封闭位点；2)通过磷酸化的挂锁探针和连接探针制备环状模板，利用核酸外切酶去除未成环的探针；3)将抗体修饰的电极与外泌体孵育，将外泌体特异性适配体‑引物探针修饰到电极表面；4)加入环状模板、聚合酶缓冲液、dNTPs、BSA及phi29DNA聚合酶，将电极在37℃孵育，再与高铁血红素溶液孵育；5)用PBS洗涤，将电极浸入到工作溶液进行电化学测量，电极工作溶液的成分为：PBS+100mM KCl+8mM H2O2。
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