[发明专利]一种稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。以稳定同位素标记苯甲醛与对甲苯磺酰肼为原料，在溶剂存在作用下，得到稳定同位素标记苯甲醛与对甲苯磺酰肼缩合的中间体，在无机碱和催化剂作用下，与邻苯二甲酰亚胺反应，并最后经盖布瑞尔胺合成法一锅法得到稳定同位素标记的苄胺，然后与6‑氯嘌呤经亲核取代反应，纯化，得到稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤纯品。合成所需原料、中间体简单易得，目标产物稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤化学纯度可达98％以上，同位素丰度可达99％以上，能满足液相色谱串联质谱法所需内标试剂的技术要求。目前全球尚未发现有该结构稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤的制备文献，研制稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤对食品安全监管检测工作有重要意义。

主权项

1.一种稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记的6‑苄基腺嘌呤内标试剂的化学结构如式(I)所示：其中，(I)中R为H或D，*为¹²C或¹³C，其特征在于，制备步骤如下：(1)在有机溶剂存在条件下，加入稳定同位素标记苯甲醛，然后加入对甲苯磺酰肼，在氮气保护下，在20℃～120℃条件下，反应0.5～6小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，无需处理，直接进行下一步反应；其中稳定同位素标记苯甲醛的化学结构如式(Ⅱ)所示：其中，(Ⅱ)中R为H或D，*为¹²C或¹³C；(2)将邻苯二甲酰亚胺、无机碱和催化剂加入步骤(1)得到的溶液中，在氮气保护下，在80℃～150℃条件下，反应1～10小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用水淬灭，过滤，滤液用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥，减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记N‑苯甲基邻苯二甲酰亚胺；其中稳定同位素标记N‑苯甲基邻苯二甲酰亚胺的化学结构如式(Ⅲ)所示：其中，(Ⅲ)中R为H或D，*为¹²C或¹³C；(3)将步骤(2)所得稳定同位素标记N‑苯甲基邻苯二甲酰亚胺溶于有机溶剂中，加入水合肼，在氮气保护下，在80℃～150℃条件下继续反应1‑8小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用酸淬灭，过滤，滤液再用碱的水溶液洗涤，用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥；减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到纯品稳定同位素标记苄胺；其中稳定同位素标记苄胺的化学结构如式(Ⅳ)所示：其中，(Ⅳ)中R为H或D，*为¹²C或¹³C；(4)在有机溶剂中，加入步骤(3)得到的稳定同位素标记苄胺，加入6‑氯嘌呤，在氮气保护下，在80℃～150℃条件下继续反应6‑24小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，减压蒸馏除去溶剂，残留物用有机溶剂洗涤，得到稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤的粗品；(5)在混合有机溶剂中，加入步骤(4)得到的稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤的粗品，室温搅拌12‑36小时，过滤，滤饼真空干燥得到稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤的纯品。