[发明专利]一种用于免疫治疗的腺病毒载体

摘要

本发明公开了一种用于免疫治疗的腺病毒载体，涉及基因工程技术领域，是将干扰片段序列通过基因工程技术，包装到Ad5复制缺陷型腺病毒中，构建重组腺病毒干扰载体Ad‑siDHCR24，所述Ad5复制的缺陷型腺病毒是AD293细胞，通过腺病毒外壳纤维的改造。该用于免疫治疗的腺病毒载体，在哺乳动物中产生HPV蛋白并且诱导针对HPV的免疫应答，通过在腺病毒载体中添加外源重组基因、向导标记以及酶切识别位点，从而改变了腺病毒载体的天然嗜性，使得腺病毒载体的导向更具针对性，避免腺病毒载体感染其他正常组织，使得腺病毒载体所展现的整体的毒副作用更小，从而使得腺病毒载体在免疫治疗中有着更好的效果。

主权项

1.一种用于免疫治疗的腺病毒载体，其特征在于：是将干扰片段序列通过基因工程技术，包装到Ad5复制缺陷型腺病毒中，构建重组腺病毒干扰载体Ad‑siDHCR24，所述Ad5复制的缺陷型腺病毒是AD293细胞，通过腺病毒外壳纤维的改造，将经过改造的病毒骨架质粒和携带不同外源基因的穿梭质粒共转染AD293细胞，即可包装出携带不同外源基因的靶向性腺病毒；所述腺病毒载体包括编码HPV分化体B Env蛋白的核酸的复制缺陷型腺病毒载体、编码HPV分化体C Env蛋白的核酸的复制缺陷型腺病毒载体，其中B Env蛋白的核酸的复制缺陷型腺病毒载体独立地是血清型26、血清型28和或血清型35，由此在哺乳动物中产生HPV蛋白并且诱导针对HPV的免疫应答，将B Env蛋白的核酸的复制缺陷型腺病毒载体中的阳性克隆菌分别在含Amp和Cm的抗性培养基中生长，且在含Amp和Cm抗性培养基中不能生长的克隆菌即为目的阳性克隆菌E；所述阳性克隆菌E中E1、E3基因被敲除之后，所述阳性克隆菌E基因组中的E4基因开放阅读框6，由E4基因开放的阅读框6为AD293细胞包装出靶向性腺病毒做向导标记，所述AD293细胞中含有插入PAD‑EFa‑GFP腺病毒载体多克隆位点的EP153R基因，所述腺病毒干扰载体Ad‑siDHCR24中还含有与启动子有效连接的CTLA4Ig重组基因。