[发明专利]一种检测乳腺癌肿瘤循环细胞的SERS试剂

摘要

本发明公开了一种检测乳腺癌肿瘤循环细胞的SERS试剂，其采用三步法或者两步法在金属纳米颗粒表面MNSs依次修饰拉曼信号分子4‑巯基苯甲酸4‑MBA、薄薄的一层还原型牛血清白蛋白rBSA、以及在rBSA层接枝靶分子叶酸FA，从而获得复合金属纳米颗粒MNSs‑MBA‑rBSA‑FA，最后经离心洗涤两次，最后分散在水相中，4°C保存。本发明得到的一种检测乳腺癌肿瘤循环细胞的SERS试剂，其可确定外周血样中是否含有乳腺癌CTCs，且SERS检测试剂于保存条件下可以稳定6个月以上。

主权项

1.一种检测乳腺癌肿瘤循环细胞的SERS试剂，其特征在于：包括以下步骤：1）制备金属纳米颗粒MNSs按重量份将60‑70份金、10‑15份银、10‑15份铂、1‑5份石墨烯、0.5‑2份铋、0.1‑0.5份钼以及0.1‑0.5份钯溶于稀盐酸溶液中，加热至沸，待冷却后，离心弃去上清液，再离心洗涤两次，贮存在4℃冰箱中待用，利用ICP‑OES测其金元素的浓度，将其浓度稀释至0.02 mg/mL；上述金属纳米颗粒的形状为金属纳米星，且定义为MNSs；2）制备还原型牛血清白蛋白‑叶酸复合物rBSA‑FA将叶酸FA、1‑乙基‑（3‑二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐EDC和N‑羟基琥珀酰亚胺NHS加入到PBS缓冲溶液中溶解，并在避光条件下搅拌反应8.0 h，即可得到活化的叶酸FA‑NHS；接着将硼氢化钠逐滴加入到牛血清白蛋白中，在室温下搅拌反应持续1.0 h，即可获得还原型牛血清白蛋白，然后把上述还原型牛血清白蛋白加入到已经活化的叶酸FA‑NHS的PBS缓冲溶液中，在室温下，反应4.0 h即可得到还原型牛血清白蛋白‑叶酸复合物rBSA‑FA，最后使用超滤离心管将反应后的溶液浓缩，并分散在超纯水中，4 °C储存待用；3）制备SERS试剂采用三步法或者两步法在金属纳米颗粒表面依次修饰拉曼信号分子4‑巯基苯甲酸4‑MBA、薄薄的一层还原型牛血清白蛋白rBSA、以及在还原型牛血清白蛋白层接枝靶分子叶酸FA，从而获得复合金属纳米颗粒MNSs‑MBA‑rBSA‑FA，最后经离心洗涤两次，最后分散在水相中，4 °C保存，利用ICP‑OES测纳米粒子的金元素浓度，将其浓度稀释至0.5 mg/mL。