[发明专利]一种用于葡萄汁真伪鉴定的液相色谱-同位素质谱联用方法

摘要

本发明提供一种用于葡萄汁真伪鉴定的液相色谱‑同位素质谱联用方法，具体涉及检测技术领域，本发明通过测定纯正葡萄汁中果糖、葡萄糖、二糖及多糖(如含有)的δ¹³C值，建立对应的同位素差值数据库。将待测葡萄汁与纯正葡萄汁中的同位素差值进行比对，由此判断待测葡萄汁的真实性。本专利采用高效液相色谱仪与Delta V Advantage稳定同位素比质谱仪联用设备(HPLC‑IRMS)，仪器灵敏度高，可行性强，只需在线测定葡萄汁中糖类组分的δ¹³C。采用的葡萄汁样品少，样品处理简便快捷，无需明确掺假用糖浆来源，定性鉴别结果准确性高。

主权项

1.一种用于葡萄汁真伪鉴定的液相色谱‑同位素质谱联用方法，其特征在于，步骤如下：S1、纯正葡萄汁制备：采购企业或大型超市销售的新鲜、饱满、无病斑、整粒的葡萄，不经特殊处理后榨取纯正葡萄汁并冷冻保存备用。S2、葡萄汁样品准备：采购不同超市来源的不同品牌的市售葡萄汁(纯正或添加糖)。S3、分别称取一定量的S1和S2中的葡萄汁(0.2‑0.4mg)，超纯水稀释定容至20mL，充分涡旋，经水相滤膜过滤后进行液相－同位素比质谱分析。S4、使用Survey液相色谱仪与DELTA V Advantage同位素质谱仪(美国Thermo Scientific公司)联用检测，其中液相色谱(HPLC)条件包括：色谱柱：Rezex RCM‑Monosaccharide Ca2+(7.8*300mm)；柱温：80℃；流动相：超纯水；流速：350μL/min；氧化剂(0.14mol/L过硫酸钠溶液和0.34mol/L磷酸溶液)流速：50μL/min；氧化炉温度：99.9℃；进样体积：6‑12μL。同位素质谱(IRMS)条件包括：电子轰击离子源(Electron impact ion source EI)；氦气Purge压力：1.4bar；氦气carrier压力：2.0bar；二氧化碳压力：0.5bar；离子源电压：3.06KV；真空度：1.8×10‑6mbar；扫描方式：正离子扫描；测定质量数：44/45/46。S5、仪器测定及进样：进样前仪器平衡至少15min，待流动相压力≤60bar，二氧化碳(44)背景值≤300mV，氧气(32)值≥5000mV，并进行RefCO2 On/Off测试，d13C/12C Std.Dev.小于0.06‰，方可开始进样。S6、葡萄汁样品中糖类物质的δ13C值的确定使用软件Isodat 3.0。δ13C值的计算基于国际标准物质Viennapeedee belemnite standard(VPDB)，计算公式为：δ13C＝(Rsample－RVPDB)/RVPDB×1000，其中Rsample为样品的13C与12C的同位素比值13C/12C，RVPDB＝0.0112372。高纯CO2参考气体的δ13C标定值为‑17.80‰。