[发明专利]一种利用HPLC特征图谱检测鉴别白芍与酒白芍的方法

摘要

本发明公开了一种利用HPLC特征图谱检测鉴别白芍与酒白芍的方法，该方法包括白芍饮片与酒白芍饮片供试品溶液的制备；分别精密吸取白芍饮片与酒白芍饮片供试品溶液注入液相色谱仪，建立白芍饮片与酒白芍饮片的特征图谱，计算各特征峰的相对峰面积与相对保留时间；利用方差分析法，分析白芍饮片酒炙前后的差异性物质；将待测白芍样品与白芍饮片与酒白芍饮片的特征图谱进行比较，计算1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖的相对峰面积，确定白芍样品是否酒炙。与药典规定的芍药苷含量检测方法相比，该方法能够有效、准确、特征性强的鉴别白芍与酒白芍饮片差异，对临床酒白芍饮片质量控制具有十分重要的意义。

主权项

1.一种利用HPLC特征图谱检测鉴别白芍与酒白芍的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）白芍饮片与酒白芍饮片供试品溶液的制备：分别将白芍饮片和酒白芍饮片粉碎成中粉，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流或超声处理15‑45分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；（2）色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；进样量为10μl；检测波长为230nm；（3）特征图谱的建立：分别精密吸取白芍饮片与酒白芍饮片供试品溶液注入液相色谱仪，分析，记录白芍饮片、酒白芍饮片的液相色谱图，建立白芍饮片与酒白芍饮片的特征图谱，计算各特征峰的相对峰面积与相对保留时间；（4）方差分析：利用方差分析法，置信水平阈值设定为0.05，将置信水平小于0.05的物质视作具有显著性差异的化合物，分析白芍饮片酒炙前后的差异性物质，将1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖的相对峰面积作为白芍饮片与酒白芍饮片的鉴别依据；（5）鉴别：将待测白芍样品与白芍饮片与酒白芍饮片的特征图谱进行比较，计算1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖的相对峰面积，确定白芍样品是否酒炙，其中，白芍饮片样品色谱中，1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖色谱峰的相对峰面积应为：0.095~0.226；酒白芍饮片样品色谱中，1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖色谱峰的相对峰面积应为：0.249~0.419。