[发明专利]一种利用荧光素霉快速检测生物毒性的方法在审
| 申请号： | 201811574739.8 | 申请日： | 2018-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN109971824A | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 马瑶;孙黎;马力 | 申请（专利权）人： | 安徽汇泽通环境技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 230000 安徽省合*** | 国省代码： | 安徽;34 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种利用荧光素霉快速检测生物毒性的方法，涉及环境监测技术领域。本发明包括步骤一：将突变位点引入到luc基因；步骤二：构建克隆重组质粒；步骤三：获得定点突变的PCR产物；步骤四：构建表达重组质粒；步骤五：制备表达虫荧光素酶的基因工程菌；步骤六：提取虫荧光素酶和步骤七：虫荧光素酶毒性测试。本发明制备的突变虫荧光素酶发光能力可达到野生型荧光素酶的100倍，并且具有很好的热稳定性和耐酸碱性；同时，本发明的虫荧光素酶急性毒性生物测试法可以对淡水中污染物的急性毒性进行直接测试，并且更加的快速灵敏，在环保和环境监测领域具有更好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 虫荧光素酶 急性毒性 快速检测 生物毒性 荧光素 构建 制备 野生型荧光素酶 表达重组质粒 环境监测技术 环境监测领域 基因工程菌 生物测试法 定点突变 毒性测试 发光能力 耐酸碱性 热稳定性 突变位点 直接测试 重组质粒 突变 灵敏 污染物 克隆 引入 环保 应用 | ||
【主权项】：
1.一种利用荧光素霉快速检测生物毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将突变位点引入到luc基因；根据荧光素酶编码基因luc设计两组引物，按照overlap PCR程序扩增获得luc两端的序列，拼接片断获得突变基因片段；步骤二：构建克隆重组质粒；将突变基因与克隆载体相连后进行鉴定，获得克隆重组质粒；步骤三：获得定点突变的PCR产物；将构建的重组质粒电转到DH5α感受态细胞中进行培养，通过验证、回收得到纯化后的PCR产物；步骤四：构建表达重组质粒；提取纯化后的PCR产物的重组质粒，经酶切后与表达载体相连得到表达重组质粒；步骤五：制备表达虫荧光素酶的基因工程菌；将表达重组质粒电转到DH5α感受态细胞中进行培养，筛选鉴定出阳性重组子，并提取重组质粒转入到受体菌株BL21(DE3)中，得到可大量表达虫荧光素酶的基因工程菌；步骤六：提取虫荧光素酶；从表达虫荧光素酶的基因工程菌提取虫荧光素酶；步骤七：虫荧光素酶毒性测试；将虫荧光素酶加入到测试体系中，测试发光值的大小，与对照相比，计算发光抑制率，从而计算得出EC50值。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于安徽汇泽通环境技术有限公司，未经安徽汇泽通环境技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811574739.8/，转载请声明来源钻瓜专利网。
