[发明专利]采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法

摘要

本发明属于二十碳五烯酸和生物柴油的制备，特别是指一种采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法。包括培养微拟球藻、湿微拟球藻破壁、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA、富含EPA藻油和生物柴油的分离等工艺步骤；本发明解决了现有技术存在的生物柴油的生产成本较高以及EPA在藻油中的含量低的技术难题。具有所制备的生物柴油的密度、运动黏度和十六烷值等主要技术指标符合国标要求，可大幅度降低生物柴油的生产成本，藻油中EPA含量高等优点。

主权项

1.采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于包括如下工艺步骤：A、培养微拟球藻在灭菌后改良的f/2培养基中采用自养培养的方法培养微拟球藻制成发酵液，培养条件为采用鼓泡式光反应器培养，培养基按照体积比为60％‑90％的比例装量，接种量为每升培养基含有微拟球藻0.05克‑0.2克，培养温度为23℃‑28℃，通气速率1升/分钟‑3升/分钟，二氧化碳浓度为1％‑5％，培养周期8天‑12天；B、湿微拟球藻破壁将步骤A中获得的发酵液高速离心后获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入5毫升‑20毫升蒸馏水以及0.01％‑1％纤维素酶的比例在湿微拟球藻中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，将酶解后的物料高速离心后获得破壁的微拟球藻；C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA按照每克已破壁的微拟球藻干重加入3毫升‑5毫升的乙醇和20微升‑60微升的液体脂肪酶A的比例，在步骤B中获得的破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及液体脂肪酶A进行转酯化反应，获得低值的生物柴油和高值化的EPA，转酯化反应的条件是：温度为30℃‑40℃，转速为150转/分钟‑250转/分钟，时间为48小时‑96小时；液体脂肪酶A的选用南极假丝酵母脂肪酶A；D、富含EPA藻油和生物柴油的分离将步骤C中转酯化反应后的反应体系中加入正己烷，充分萃取后分离正己烷相并去除萃取剂，得到粗生物柴油；下层乙醇相高速离心收集乙醇，藻渣采用乙醇充分萃取，合并萃取液并去除乙醇得到富含EPA的藻油。