[发明专利]一种牛奶中氨基糖苷类药物的检测方法

摘要

本发明涉及一种牛奶中氨基糖苷类药物的检测方法，包括：(1)提取；(2)配制标准工作溶液；(3)高效液相色谱－串联质谱法测定；所述氨基糖苷类药物为巴龙霉素、妥布霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、安普霉素、链霉素、双氢链霉素、新霉素、壮观霉素和潮霉素B。本发明提取中使用MIP固相萃取柱，简化了前处理步骤，节省了试剂的消耗以及前处理所用时间；选用SiELC Obelisc R色谱柱，对11种氨基糖苷类药物分离较好；流动相无需用到七氟丁酸，不会对质谱造成污染。

主权项

1.一种牛奶中氨基糖苷类药物的检测方法，包括：(1)提取：向牛奶中加入三氯乙酸溶液和乙腈涡旋混合，超声提取，离心，取上清液，加入氨水调节pH至7.0～7.5，再离心，取上清液过已活化的MIP固相萃取柱，依次用水和乙腈淋洗小柱并抽干，弃去流出液，加入洗脱液，收集全部洗脱液，氮吹至干，加入复溶液溶解，过滤，供高效液相色谱－串联质谱仪测定；(2)配制基质标准工作溶液：分别在7份空白样品中添加不同浓度混合标准溶液，按上述步骤(1)处理，得到7个浓度的氨基糖苷类系列基质标准工作溶液；其中，浓度范围为2.0～1000μg/L；(3)高效液相色谱－串联质谱法HPLC‑MS/MS测定：液相色谱条件：色谱柱：SiELC Obelisc R色谱柱；柱温：40℃；流速：0.4mL/min；进样量：10μL；流动相：含2mM乙酸铵的甲酸水，乙腈水；质谱条件：质谱仪：AB SCIEX6500；离子源：电喷雾离子源ESI；电离模式：正离子扫描；监测方式：多反应监测MRM；离子化电压：5500V；气帘气压力：30Psi；雾化气压力：55Psi；辅助加热气：60Psi；离子源温度：450℃；碰撞气CAD：Medium；标准工作曲线的制定及定量分析：将步骤(2)中系列基质标准工作溶液进行HPLC‑MS/MS测定，将得到的氨基糖苷类药物的峰面积与相应的浓度进行回归分析，计算得出氨基糖苷类药物的标准工作曲线及其回归方程；将步骤(1)中样品液在相同条件下进行HPLC‑MS/MS测定，测得样品液中氨基糖苷类化合物的色谱峰面积，代入相应标准曲线，得到牛奶样品液中氨基糖苷类药物浓度，计算得到牛奶样品中氨基糖苷类药物的残留量；其中，所述氨基糖苷类药物为巴龙霉素、妥布霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、安普霉素、链霉素、双氢链霉素、新霉素、壮观霉素和潮霉素B。