[发明专利]用于从预文库中富集靶标序列的试剂盒、制备方法和应用在审
| 申请号： | 201811583396.1 | 申请日： | 2018-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN109355289A | 公开（公告）日： | 2019-02-19 |
| 发明（设计）人： | 王永利;宋卓 | 申请（专利权）人： | 人和未来生物科技（长沙）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 李小焦;彭家恩 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市高新*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本申请公开了一种用于从预文库中富集靶标序列的试剂盒、制备方法和应用。本申请的试剂盒包括蛋白核酸复合物、DNA连接酶和捕获接头；蛋白核酸复合物由Cas酶和RNA引导序列组装成，RNA引导序列能特异性与靶标序列结合，Cas酶将靶标序列切割；DNA连接酶将捕获接头连接到被切割的靶标序列；然后通过捕获接头或捕获接头与靶标序列连接时的polyA尾的修饰将靶标序列分离、富集。本申请的试剂盒，利用蛋白核酸复合物精准识别和切割靶标序列，采用不同的RNA引导序列，可以富集多个靶标区域，且没有多重PCR富集的偏好性，可检测点突变、小插入和缺失、基因融合等多种变异类型，使用简单、成本低廉、准确度高。 | ||
| 搜索关键词： | 靶标 富集 试剂盒 捕获 蛋白核酸 引导序列 复合物 制备方法和应用 文库 切割 申请 准确度 变异类型 基因融合 接头连接 序列分离 序列连接 序列切割 多重PCR 点突变 可检测 偏好性 修饰 组装 | ||
【主权项】：
1.一种用于从预文库中富集靶标序列的试剂盒，其特征在于：包括蛋白核酸复合物、DNA连接酶和捕获接头；所述蛋白核酸复合物由Cas酶和RNA引导序列组装而成，所述RNA引导序列能够特异性的与靶标序列结合，所述Cas酶能够特异性的识别与RNA引导序列结合的靶标序列，并将靶标序列切割；所述DNA连接酶用于将所述捕获接头连接到被切割的靶标序列的切割末端；所述捕获接头为一段DNA序列，用于将靶标序列从预文库中区分开来，并通过捕获接头的修饰将靶标序列分离、富集；或者通过在将捕获接头与靶标序列切割末端连接时的polyA尾的修饰将靶标序列分离、富集。
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