[发明专利]一种快速定量检测VBNC状态副溶血性弧菌的方法在审
| 申请号： | 201811584939.1 | 申请日： | 2018-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN109735604A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 王丽;曹潇;吕新瑞;赵力超;张竟丰 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6804;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林丽明 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供了一种快速定量检测VBNC状态副溶血性弧菌的方法，包括如下步骤：S1.诱导副溶血性弧菌进入VBNC状态；S2.生物素化多克隆抗体和免疫磁珠的制备；S3.免疫磁珠富集，免疫磁珠所需体积为10μL~200μL，副溶血性弧菌菌液所需体积为0.5~1mL；S4.PMAxx染色：在步骤S3富集后的样品中加入PMAxx使其终浓度达到10~20μmol/L，染色后进行检测。本发明提供了一种快速定量检测VBNC状态副溶血性弧菌的方法，首次将免疫磁珠技术、PMAxx染料以及qPCR定量检测技术相结合应用于实际样品免前增菌条件下VBNC状态菌的检测中。通过实验能够证明，该方法对VBNC状态副溶血性弧菌的检测限为1.05CFU/g，该方法不仅灵敏度高且特异性好。 | ||
| 搜索关键词： | 副溶血性弧菌 免疫磁珠 检测 快速定量 染色 富集 定量检测技术 多克隆抗体 结合应用 生物素化 实际样品 灵敏度 染料 菌液 增菌 制备 诱导 | ||
【主权项】：
1.一种快速定量检测VBNC状态副溶血性弧菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.在‑20℃条件下诱导副溶血性弧菌进入VBNC状态；S2：生物素化多克隆抗体和免疫磁珠的制备：将灭活得到的副溶血性弧菌抗原注射入新西兰大白兔体内进行免疫反应得到兔多抗血清，然后经ProteinG/A亲和纯化至效价大于1:50000，最后标记生物素得到生物素化的副溶血性弧菌多克隆抗体；将链霉亲和素磁珠用无菌PBST溶液洗涤2~3次后，再加入上述生物素化的副溶血性弧菌多克隆抗体，孵育制备免疫磁珠；S3.免疫磁珠富集：将步骤S2中经过处理的免疫磁珠与步骤S1中进入VBNC状态的副溶血性弧菌菌液进行混合，得到富集液，其中，免疫磁珠的浓度为0.5~1 mg/mL，副溶血性弧菌菌液的浓度为104 ~106 CFU/mL；免疫磁珠的体积为10μL~200μL，副溶血性弧菌菌液的体积为0.5~1 mL；S4.PMAxx染色：在步骤S3得到的富集液中加入PMAxx使其终浓度达到10~20 μmol/L，染色后进行检测。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华南农业大学，未经华南农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811584939.1/，转载请声明来源钻瓜专利网。
