[发明专利]一种利用CRISPR/Cas9+AAV制备通用型CAR-T细胞的方法在审
| 申请号： | 201811602586.3 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109609551A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 邱壮伟;丘力功;符美娟;李润明;倪世明;郝宇 | 申请（专利权）人： | 广州白云山拜迪生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文;宋静娜 |
| 地址： | 510070 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用CRISPR/Cas9+AAV制备通用型CAR‑T细胞的方法，属于免疫细胞治疗领域。本发明利用CRISPR/Cas9+AAV敲除免疫检查点PD‑1、人类白细胞抗原(HLA)以及TCR，多基因敲除制备通用型CAR‑T细胞，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行精确基因敲除，同时与腺相关病毒(AAV)融合运用，代替慢病毒实现精确基因敲入，避免慢病毒随机整合潜在的风险。本发明的方法可以实现多靶点基因敲入和敲除，构建通用型CAR‑T细胞用于异体治疗，解决传统CAR‑T细胞治疗存在的慢病毒随机插入性突变风险、自体CAR‑T的设计及培养制备成本过高、制备周期长，细胞数量及扩增能力不足等问题。 | ||
| 搜索关键词： | 通用型 制备 慢病毒 敲除 基因 人类白细胞抗原 免疫细胞治疗 腺相关病毒 细胞 基因敲除 免疫检查 能力不足 制备周期 插入性 多靶点 多基因 潜在的 构建 扩增 整合 治疗 自体 突变 融合 | ||
【主权项】：
1.一种利用CRISPR/Cas9+AAV制备通用型CAR‑T细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用磁珠分离获得高纯度的CD3+T细胞，进行活化处理；(2)利用CRISPR/Cas9技术进行基因编辑，构建CAR表达载体；(3)用腺相关病毒包装步骤(2)所得的CAR表达载体，扩增，得到携带CAR的腺相关病毒，并侵染T细胞；(4)T细胞扩增培养，得CAR‑T细胞。
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