[发明专利]一种人血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物浓度的检测方法

摘要

本发明公开了一种人血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物浓度的检测方法，包括如下步骤：(1)标准工作溶液的配制；(2)样品处理；(3)标准曲线制作；(4)定量分析：取试验样品按照步骤(2)的方法处理，并按步骤(3)所得的标准曲线方程计算，得到待测样品中替格瑞洛及其活性代谢产物的浓度。本发明应用高效液相色谱技术(HPLC)测定人血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物的浓度，准确定量人血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物的浓度，通过色谱柱、前处理方法、流动相、质谱条件等的合理选择，流速、流动相比例、色谱条件等实验条件的优化，经过系列方法学验证，使得整个定量检测方法切实可行，操作简便，重复性高，准确性好，可操作性强，可以直接运用于临床患者血浆样品检测分析及相关药代动力学分析。

主权项

1.一种人血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物浓度的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)标准工作溶液的配制：精密称取替格瑞洛及其活性代谢产物AR‑C124910XX，加入50v/v％乙腈溶液，配制成浓度为2000μg/mL的替格瑞洛储备液及1000μg/mL的AR‑C124910XX储备液，将替格瑞洛储备液用50v/v％乙腈溶液稀释成梯度浓度为500、1000、2000、5000、7500、10000ng/mL的替格瑞洛工作溶液，将AR‑C124910XX储备液用50v/v％乙腈溶液稀释成梯度浓度为200、500、1000、2000、3000、5000ng/mL的AR‑C124910XX工作溶液；将替格瑞洛储备液用50v/v％乙腈溶液稀释成梯度浓度为800、3000、8000ng/mL的替格瑞洛质控溶液，将AR‑C124910XX储备液用50v/v％乙腈溶液稀释成梯度浓度为400、1500、4000ng/mL的AR‑C124910XX质控溶液；精密称取伏立康唑，加入50v/v％乙腈溶液，配制成浓度为50μg/mL的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在4℃下保存，备用；取空白人正常血浆，分别加入所述的替格瑞洛工作溶液和AR‑C124910XX工作溶液，混匀，配置成相应梯度的校正标样，替格瑞洛校正标样的梯度浓度范围为50～1000ng/mL，AR‑C124910XX校正标样的梯度浓度范围为20～500ng/mL；取空白人正常血浆，分别加入所述的替格瑞洛质控溶液和AR‑C124910XX质控溶液，混匀，配置成相应浓度的质控样品，替格瑞洛质控样品的梯度浓度为：80、300、800ng/mL，AR‑C124910XX质控样品的梯度浓度范围为40、150、400ng/mL；(2)样品处理：分别取等体积的校正标样、质控样品、待测样品、空白人正常血浆，分别向校正标样、质控样品、待测样品中加入内标工作溶液，空白人正常血浆中加入等体积水；向上述每个混合液中分别加入乙腈，混匀，离心，取上清液，通过0.22μm滤膜过滤，得到提取物，待测；(3)标准曲线制作：将步骤(2)得到的校正标样、质控样品的提取物进行HPLC分析测定，分别以替格瑞洛、AR‑C124910XX和内标的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中替格瑞洛、AR‑C124910XX的浓度为横坐标制作标准曲线；(4)定量分析：取待测样品按照步骤(2)的方法处理，并按步骤(3)所得的标准曲线方程计算，得到待测样品中替格瑞洛、AR‑C124910XX的浓度。