[发明专利]一种胎盘间充质干细胞条件培养基的制备方法在审

专利信息
申请号: 201811619614.2 申请日: 2018-12-27
公开(公告)号: CN109486748A 公开(公告)日: 2019-03-19
发明(设计)人: 黄丽贞;陈志胜;郑桂纯;赵姝灿;张晓芳 申请(专利权)人: 佛山科学技术学院
主分类号: C12N5/073 分类号: C12N5/073;C12N5/0775
代理公司: 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 代理人: 谢泳祥
地址: 528000 广东省佛山市*** 国省代码: 广东;44
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摘要: 发明公开了一种胎盘间充质干细胞条件培养基的制备方法,其包括如下工艺步骤:1)培养P1代细胞;2)条件培养基制备:将细胞传代培养至P3代时,加入含有10%无菌过滤胎牛血清和1%双抗的DMEM培养基继续培养48h后收集细胞培养培上清液,继续收集P4~6代的细胞培养上清液,将收集的上清液用0.22μm滤器过滤后获得成品,控制总蛋白浓度为4μg/mL,4℃保存备用。本发明所制备的条件培养基含有许多生物活性物质,可促进细胞增殖和抑制凋亡,具有抗氧化和免疫调节作用,能显著提高衰老的人皮肤成纤维细胞的活力,具有延缓皮肤衰老、保持皮肤稳态的作用,在美容护肤产品的开发中具有强大的应用前景。
搜索关键词: 条件培养基 制备 胎盘间充质干细胞 上清液 细胞培养 人皮肤成纤维细胞 细胞培养上清液 促进细胞增殖 美容护肤产品 免疫调节作用 生物活性物质 延缓皮肤衰老 工艺步骤 胎牛血清 无菌过滤 细胞传代 抗氧化 总蛋白 凋亡 双抗 稳态 衰老 备用 过滤 皮肤 细胞 保存 应用 开发
【主权项】:
1.一种胎盘间充质干细胞条件培养基的制备方法,其特征在于包括如下工艺步骤:1)分离培养:采用剪切分离与胶原酶消化法从人胎盘组织中分离胎盘间充质干细胞,在胎儿间充质培养基中进行培养,当发现细胞集落生长,贴壁细胞融合至70~80%时用胰蛋白酶消化,将所得细胞悬液进行传代,得P1代细胞;2)条件培养基制备:继续用胎儿间充质培养基培养步骤1)所得P1代细胞并进行传代,将细胞传代培养至P3代时,待细胞生长至70~80%,弃去胎儿间充质培养基,用PBS溶液清洗一次,加入含有10%无菌过滤胎牛血清和1%双抗的DMEM培养基继续培养48h后收集细胞培养培上清液,继续收集P4~6代的细胞培养上清液,将收集的上清液用0.22μm滤器过滤后获得成品,控制总蛋白浓度为4μg/mL,4℃保存备用。
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