[发明专利]一种褐藻胶裂解酶固定化酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种褐藻胶裂解酶固定化酶的制备方法，采用壳聚糖、罗望子胶－戊二醛交联吸附的方法，将褐藻胶裂解酶固定于介质之上，它包括壳聚糖载体的精制、交联试剂的配制、壳聚糖、罗望子胶－戊二醛的交联、褐藻胶裂解酶的提取及固定等步骤。本发明所制备的褐藻胶裂解酶固定化酶，催化能力和对不同环境(温度、pH、贮存时间)的稳定性都有明显提高，用固定化酶处理海藻酸钠，采用离子树脂吸附降解产物，筛网过滤的方法回收固定化酶，采用超滤膜过滤的方法回收游离状态的酶，可以反复利用，提高了褐藻寡糖的得率，生产过程简单，生产成本大幅度下降，满足了褐藻寡糖产品的工业化生产要求。

主权项

1.一种褐藻胶裂解酶固定化酶的制备方法，其特征在于利用壳聚糖‑罗望子胶‑戊二醛交联的方法制备固定化介质，之后通过活化加入游离褐藻胶裂解酶，制得固定化褐藻胶裂解酶，其具体步骤如下:(1)将壳聚糖与罗望子胶混合后研磨成粉，过60目筛，室温下浸泡4h，冲洗掉杂质，抽滤后烘干；(2)将壳聚糖‑罗望子胶混合物用3％的乙酸溶液溶解，终浓度为2％‑5％，超声至气泡消失变成透明凝胶；取凝胶加入至凝结液中，硬化过夜，水洗至中性，4℃保存；(3)称取壳聚糖‑罗望子胶小球置于戊二醛溶液中，缓冲液pH为5‑7之间，30℃下浸泡并温和搅拌1‑5h，静置并去除上清液，使用同样pH缓冲液反复冲洗交联后的小球，并抽滤除去多余的戊二醛，4℃保存；(4)向交联后的壳聚糖‑罗望子胶小球中加入一定量的褐藻胶裂解酶，用缓冲液稀释后，温和搅拌静置3h，之后再温和搅拌一次，4℃静置过夜；去除上清液得到固定化褐藻胶裂解酶。