[发明专利]一种香蕉枯萎菌低丰度milRNAs的体外验证方法有效
申请号: | 201811630270.5 | 申请日: | 2018-03-02 |
公开(公告)号: | CN109679988B | 公开(公告)日: | 2020-08-14 |
发明(设计)人: | 彭军;曾凡云;张欣;漆艳香;谢艺贤;丁兆建;刘远征;孟春亮 | 申请(专利权)人: | 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82;C12Q1/6876 |
代理公司: | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人: | 陈欢 |
地址: | 570100 海*** | 国省代码: | 海南;46 |
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摘要: | 本发明公开了一种香蕉枯萎菌低丰度milRNAs的体外验证方法,包括以下步骤:S1、在香蕉枯萎菌的基因组DNA中设计引物扩增含有候选milRNA骨架的DNA序列,将所述DNA序列连接到表达载体上;S2、构建好的载体转化到农杆菌感受态细胞,进行LB培养,得菌液;S3、用步骤S2所得菌液浸润本生烟叶片,取叶片进行对应的小RNA探针杂交检测,判断候选milRNAs发夹序列是否可以加工成为成熟的milRNA。本发明方法利用本生烟作为替代植物,可以对milRNAs的靶标及其功能进行有效的分析,可以对深度测序的数据进行高通量的分析和验证,克服了目前小RNA研究中的不足,具有广泛的应用前景。 | ||
搜索关键词: | 一种 香蕉 枯萎 菌低丰度 milrnas 体外 验证 方法 | ||
【主权项】:
1.一种香蕉枯萎菌低丰度milRNAs的体外验证方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:在香蕉枯萎菌的基因组DNA中设计引物扩增含有候选milRNA骨架的DNA序列,将所述DNA序列连接到表达载体上;S2:构建好的载体转化到农杆菌感受态细胞,进行LB培养,得菌液;S3:用步骤S2所得菌液浸润本生烟叶片,取叶片进行对应的小RNA探针杂交检测,判断候选milRNAs发夹序列是否可以加工成为成熟的milRNA。
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