[发明专利]一种重组人源脂肪细胞肽的创新制备工艺（简称：BMP-2干细胞）在审
| 申请号： | 201811634173.3 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109666688A | 公开（公告）日： | 2019-04-23 |
| 发明（设计）人： | 易金阳 | 申请（专利权）人： | 易金阳 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/12;C07K14/51 |
| 代理公司： | 北京金咨知识产权代理有限公司 11612 | 代理人： | 吕晓阳 |
| 地址： | 518000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组人源脂肪细胞肽的创新制备工艺(简称：BMP‑2干细胞)，包括如下步骤：BMP‑2干细胞的基因合成、具体为成熟肽的表达体系构建、诱导表达、分离纯化与扩增等多种步骤。本发明采用一种新颖的PCR扩增方法，在快速合成目的基因的同时构建高效表达载体；本发明所采用的启动子为Trc启动子，弱于原核表达系统常采用的T7启动子，可以实现在较高温度下可溶表达；并在基因的C端增加来源于酿酒酵母的分子伴侣PDI蛋白，更利于蛋白的正确折叠，保持BMP‑2干细胞的可溶性和高活性；在基因N端添加6×HIS标签，实现BMP‑2干细胞的快速分离纯化。本发明公开的方法，简便灵活，产品分离纯化工艺简单，纯度高，活性高，生产成本低，在临床病毒防治、抵抗细胞衰老、促进伤口愈合及在表皮、真皮、粘膜中的修复作用和在医疗、美容、保健等领域拥有广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 干细胞 脂肪细胞 制备工艺 构建 人源 蛋白 高效表达载体 原核表达系统 分子伴侣PDI 生产成本低 表达体系 病毒防治 产品分离 分离纯化 基因合成 快速分离 快速合成 目的基因 酿酒酵母 伤口愈合 细胞衰老 诱导表达 成熟肽 高活性 活性高 启动子 粘膜 折叠 基因N 表皮 真皮 可溶 扩增 美容 抵抗 修复 基因 灵活 医疗 应用 | ||
【主权项】：
1.一种重组人源脂肪细胞肽的创新制备工艺(简称：BMP‑2干细胞)，其特征在于依次包括以下步骤：(1)通过多重PCR快速合成基因同时构建表达载体；(2)表达质粒导入宿主菌构建表达工程菌；(3)发酵工程菌，30℃条件下诱导表达；(4)对表达产物进行酶切释放BMP‑2干细胞，经镍柱分离纯化获得BMP‑2干细胞精品。
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