[发明专利]一种低速超滤离心结合聚合物沉淀技术分离外泌体的方法

摘要

本发明提供了一种低速超滤离心结合聚合物沉淀技术分离外泌体的方法，所述的方法通过低速离心及超滤离心管进行浓缩后，再结合聚合物沉淀技术分离外泌体，仅需实验室常见的台式离心机及价格低廉的超滤离心管，操作方法简单易行，且不影响外泌体生物活性。本发明也有效解决了神经细胞较其它细胞分泌外泌体量少，分离富集难的问题。同时，由于含有外泌体的液体经过有效浓缩，使用的聚合物试剂大大减少，较之于现有技术，本发明的分离纯度与效率更高、可操作性强、可降低分离外泌体成本，具有良好的科学应用推广价值和应用前景。

主权项

1.一种基于低速超滤离心结合聚合物沉淀技术分离外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)神经细胞培养48～72h后收集培养上清液，离心去除悬浮细胞后得到第一上清液，再次离心去除细胞碎片，得到第二上清液；(2)通过0.22μm滤膜对第二上清液进行过滤，去除细菌和残留细胞器，得到外泌体初步滤液；(3)将步骤(2)中的外泌体初步滤液进行低速超滤离心，得到浓缩液1，加入PBS溶液洗涤再次低速超滤离心，收集不能通过滤膜产物，为浓缩液2；(4)将步骤(3)中的浓缩液2与聚乙二醇溶液混匀，4℃孵育过夜，得到反应液；(5)将步骤(4)的反应液离心取沉淀，对沉淀再次离心，所得沉淀即为所述的外泌体；所述的低速离心指转速为8000r/min以下，相对离心力为10 000×g以下的离心。