[发明专利]凝血因子Ⅹ激活剂RVV-Ⅹ的制备方法及制得的RVV-Ⅹ有效
| 申请号： | 201811636120.5 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109652398B | 公开（公告）日： | 2021-07-20 |
| 发明（设计）人： | 谢永华;李存存 | 申请（专利权）人： | 上海太阳生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘伟;赵青朵 |
| 地址： | 201108 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，公开了凝血因子X激活剂RVV‑X的制备方法及制得的RVV‑X。本发明所述制备方法以圆斑蝰蛇毒为原料，溶于缓冲液后经分子筛层析柱进行粗分离，缓冲液洗脱，收集具有RVV‑X活性的洗脱峰，浓缩采用弱阳离子柱进行分离纯化，用含0‑0.5mol/L NaCl的缓冲液梯度洗脱，收集具有RVV‑X活性的洗脱峰。本发明所述制备方法原料圆斑蝰蛇毒易于获得，采用分子筛层析柱进行粗分离，分子筛填料物理性质稳定，避免了每次的重新装柱过程，更利于放大生产。本发明所述制备方法通过两步过柱分离可以获得79KD和98KD的两种RVV‑X，制备步骤少，得率高，制得的两种RVV‑Ⅹ纯度高，且稳定性好。 | ||
| 搜索关键词： | 凝血 因子 激活剂 rvv 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.凝血因子Ⅹ激活剂RVV‑Ⅹ的制备方法，包括如下步骤：1)圆斑蝰蛇毒溶于缓冲液后经分子筛层析柱分离，缓冲液洗脱，用核酸蛋白检测仪监测，根据A280nm值绘出洗脱线，采用发色底物法检测确定具有RVV‑Ⅹ活性的洗脱峰，收集浓缩；2)将步骤1)活性峰浓缩液，采用弱阳离子柱进行分离，用含0‑0.5mol/L NaCl的缓冲液梯度洗脱，用核酸蛋白检测仪监测，根据A280nm值绘出洗脱线，采用发色底物法检测分别收集具有RVV‑Ⅹ活性的洗脱峰。
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