[发明专利]一种黄瓜绿斑驳花叶病毒诱导的基因沉默载体及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201811637184.7 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109576303B | 公开（公告）日： | 2021-09-07 |
| 发明（设计）人： | 刘美;古勤生 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院郑州果树研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82 |
| 代理公司： | 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 11616 | 代理人： | 王翠 |
| 地址： | 450000 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明基于CGMMV构建了可以在葫芦科作物中应用的新的VIGS载体，并提供了携带八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段的黄瓜绿斑驳花叶病毒重组载体。西瓜，甜瓜，黄瓜和瓠瓜等葫芦科植物是CGMMV的自然寄主，本发明的重组载体可有效降低葫芦科作物中PDS基因的表达水平，使植株产生PDS基因被沉默的光漂白表型。该重组载体的成功构建可用于研究基因功能，为挖掘具有重要农艺性状的葫芦科植物基因，培育优良，抗病，特色的品种奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 黄瓜 斑驳 花叶 病毒 诱导 基因 沉默 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种黄瓜绿斑驳花叶病毒诱导的基因沉默载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)根据黄瓜绿斑驳花叶病毒基因组和外壳蛋白亚基因组启动子信息选择合适的多克隆位点；(2)基于黄瓜绿斑驳花叶病毒的全长侵染性克隆构建含BamHI酶切位点的载体，并命名为CGMMV‑BamHI；(3)扩增PDS基因片段，分别获得69bp、150bp、213bp和300bp长度的PDS基因片段；(4)将上述扩增的PDS基因片段连入线性化载体CGMMV‑BamHI中，分别形成重组载体CGMMV‑BamHI‑PDS69、CGMMV‑BamHI‑PDS150、CGMMV‑BamHI‑PDS213和CGMMV‑BamHI‑PDS300。
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