[发明专利]示踪猪GADD45a亚细胞定位的方法及用途在审
| 申请号： | 201811638185.3 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109735565A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 单体中;有文静;刘嘉琪;徐子叶;孙晔;汪以真 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/12 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪GADD45a荧光示踪表达载体的构建方法，包括以下步骤：根据pEGFP‑N1载体的信息和猪GADD45a全长基因序列设计并合成扩增GADD45a全长的引物Ⅰ，同时根据pEGFP‑N1载体上的XhoI酶切位点，设计含有载体末端15‑25bp同源臂的目的基因的引物Ⅱ；将扩增得到的基因片段割胶回收，然后与线性化的pEGFP‑N1载体同源重组，将同源重组产物转化大肠杆菌DH5α，经筛选、鉴定后，构建得到带绿色荧光报告基团的pEGFP‑GADD45a的重组质粒；其能用于研究示踪猪GADD45a在不同细胞中的定位。本发明开拓了目前研究猪GADD45a功能及其定位方面研究的新思路。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌DH5 α 构建 扩增 示踪 引物 全长基因序列 同源重组产物 亚细胞定位 表达载体 割胶回收 基因片段 绿色荧光 目的基因 同源重组 荧光示踪 载体末端 重组质粒 同源臂 线性化 位点 种猪 研究 合成 筛选 细胞 转化 | ||
【主权项】：
1.一种猪GADD45a荧光示踪表达载体的构建方法，其特征是包括以下步骤：1)、根据pEGFP‑N1载体的信息和猪GADD45a全长基因序列设计并合成扩增GADD45a全长的引物Ⅰ，同时根据pEGFP‑N1载体上的XhoI酶切位点，设计含有载体末端15‑25bp同源臂的目的基因的引物Ⅱ；2)、GADD45a荧光示踪表达载体的构建：将利用含有载体末端15‑25bp同源臂的GADD45a基因引物扩增得到的基因片段割胶回收，然后与线性化的pEGFP‑N1载体同源重组，将同源重组产物转化大肠杆菌DH5α，经筛选、鉴定后，构建得到带绿色荧光报告基团的pEGFP‑GADD45a的重组质粒。
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