[发明专利]一种用于检测TSPYL5基因甲基化的荧光定量PCR的方法在审
| 申请号： | 201811638275.2 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN110257511A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 王诺;吴楚玥;彭芳霁;曾强;黄晶;尹新涛;吴边;胡良平;尹碧;罗玉东 | 申请（专利权）人： | 武汉生命科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 刘江炀 |
| 地址： | 430075 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用于检测TSPYL5基因甲基化的荧光定量PCR的方法，具体操作方法包括如下步骤：第一步，提取待测样本基因组DNA，将待测样本基因DNA置于甲基化检测区Ⅰ；第二步，使用甲基化敏感性限制性内切酶HapaⅡ对检测区Ⅰ内待测样本基因组DNA进行酶切；第三步，使用引物对A对酶切产物进行荧光定量PCR扩增；第四步，对PCR产物的Ct值进行分析；第五步，根据分析Ct值得判断结果，判断样本中TSPYL5基因的甲基化水平程度。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光定量PCR 待测样本 基因甲基化 基因组DNA 甲基化敏感性限制性内切酶 甲基化检测 甲基化水平 酶切产物 判断结果 基因DNA 检测区 检测 扩增 酶切 引物 样本 分析 基因 | ||
【主权项】：
1.一种用于检测TSPYL5基因甲基化的荧光定量PCR的方法，其特征在于：具体操作方法包括如下步骤：第一步，提取待测样本基因组DNA，将待测样本基因DNA置于甲基化检测区Ⅰ；第二步，使用甲基化敏感性限制性内切酶HapaⅡ对上述的检测区Ⅰ内待测样本基因组DNA进行酶切；第三步，使用引物对A对酶切产物进行荧光定量PCR扩增；第四步，对PCR产物的Ct值进行分析；第五步，根据分析Ct值得判断结果，判断样本中TSPYL5基因的甲基化水平程度；其中，步骤三中的引物对A优选为以下三对引物中的一对；AF1：5’‑CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG‑3’，AR1：5’‑GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG‑3’；AF2：5’‑GTAGGCGTGTACGGTGGGAG‑3’，AR2：5’‑AACGCACACCGGCCTTATTC‑3’；AF3：5’‑GCATGATGACCACCGATATG‑3’，AR3：5’‑AATCTCGCCGGATCCTAACT‑3’。
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