[发明专利]一种布鲁氏菌三种基因重组质粒、构建方法及其在大肠杆菌中的表达和应用

摘要

本发明公开了一种布鲁氏菌三种基因重组质粒、构建方法及其在大肠杆菌中的表达和应用，属于基因工程技术领域。其技术方案为：所述重组质粒是以pET‑28a（+）质粒为载体，在pET‑28a（+）限制性酶切位点BamHI和XhoI之间插入合成的Omp10‑Omp28‑L7/L12基因全长，建成含有Omp10‑Omp28‑L7/L12基因片段和卡那霉素筛选标签的pET‑28a（+）重组质粒，即pET‑28a（+）‑Omp10‑Omp28‑L7/L12重组质粒。本发明的有益效果为：本发明成功克隆布鲁氏菌Omp10‑Opm28‑L7/L12，并连接转化至表达质粒，实现了重组质粒在大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达，表达的蛋白能在体液及细胞水平上抑制布鲁氏菌的感染、增殖和迁移能力，并可促进小鼠体内抗体的水平及延长免疫时间，为布鲁氏菌病的治疗提供新的治疗思路。

主权项

1.一种布鲁氏菌三种基因重组质粒，其特征在于，所述重组质粒是以pET‑28a（+）质粒为载体，在pET‑28a（+）限制性酶切位点BamHI和XhoI之间插入合成的Omp10‑Omp28‑L7/L12基因全长，建成含有Omp10‑Omp28‑L7/L12基因片段和卡那霉素筛选标签的pET‑28a（+）重组质粒，即pET‑28a（+）‑Omp10‑Omp28‑L7/L12重组质粒，所述Omp10‑Omp28‑L7/L12基因片段的基因扩增序列如SEQ ID NO：5 所示。