[发明专利]一种低起始量PCR-free高通量测序文库的构建方法在审
申请号: | 201811644479.7 | 申请日: | 2018-12-29 |
公开(公告)号: | CN109609597A | 公开(公告)日: | 2019-04-12 |
发明(设计)人: | 孙广欣;王冬;王建伟;伍启熹;刘倩;刘珂弟;唐宇 | 申请(专利权)人: | 北京优迅医学检验实验室有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6806 | 分类号: | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王文君;陈征 |
地址: | 100195 北京市海淀区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明涉及生物信息学领域,具体提供了一种低起始量PCR‑free高通量测序文库的构建方法,包括以下步骤:(1)提取血浆中cfDNA,对其进行末端修复和5’末端磷酸化,末端修复产物用磁珠纯化回收;(2)对纯化后的末端修复产物,3’末端加“A”碱基和接头连接体系整合在一个体系中进行反应;(3)接头产物用磁珠纯化,获得测序文库。该构建方法的优点在于成本低、耗时短,文库构建无需PCR扩增,保持稳定的数据产出,对起始DNA的量要求不高,仅1‑2ng的cfDNA用量就能够满足建库需要,用于有效的测序,在实现高通量测序、无创诊断等研究中具有非常广阔的应用前景。 | ||
搜索关键词: | 测序文库 末端修复 构建 磁珠纯化 高通量 起始量 生物信息学领域 高通量测序 接头连接 末端磷酸 文库构建 起始DNA 测序 碱基 建库 无创 整合 血浆 耗时 回收 诊断 应用 研究 | ||
【主权项】:
1.一种低起始量PCR‑free高通量测序文库的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取血浆中cfDNA,对其进行末端修复和5’末端磷酸化,纯化回收末端修复产物;(2)对纯化后的末端修复产物,3’末端加“A”碱基和接头连接体系整合在一个体系中先后进行反应;(3)纯化接头产物,获得测序文库。
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