[发明专利]一种固定化胰蛋白酶的方法

摘要

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种固定化胰蛋白酶的方法，包括将固定材料加入醋酸水溶液中；加入20‑30二氧化硅球；将第二溶液滴入氢氧化钠、乙醇的水溶液中；氢氧化钠溶液加热促进小球A中的二氧化硅溶解；取出小球B清洗；小球C放入甘油溶液中浸泡；小球D，置于烤箱中烘干；取小球E加入戊二醛溶液修饰表面基团，洗涤；将小球F固定、冲洗得到固定化胰蛋白酶。该固定化胰蛋白酶的方法选用的壳聚糖表面有大量的氨基，可在戊二醛的修饰下与酶分子交联；二氧化硅与热碱在壳聚糖小球内部产生孔道，增大了载体的比表面积，提高了单位质量载体的载酶量；使用的壳聚糖，二氧化硅，戊二醛，氢氧化钠，醋酸均为化学大宗商品，价廉易得。

主权项

1.一种固定化胰蛋白酶的方法，包括以下步骤：步骤一：选择固定化胰蛋白酶的材料40‑50份，醋酸水溶液50‑100份，将固定材料加入醋酸水溶液中，调至到所需浓度，用高速搅拌机高速搅拌混匀至形成透明粘稠的均一体系溶液，得到第一溶液，静置20‑30min除去气泡；步骤二：在获得的第一溶液中加入20‑30份粒径为10μm的二氧化硅球，调制浓度是5%，用搅拌棒慢慢搅拌至小球分散均匀，得到第二溶液，减少气泡的形成；步骤三：将第二溶液通过内径1mm的管道逐滴滴入含12%氢氧化钠、20%乙醇的水溶液中，滴入的液滴在水溶液中会逐渐形成白色的小球，刚滴入时浮在液面处，后逐渐沉入底部，得到小球A；步骤四：取50‑100份的5%氢氧化钠溶液置于量杯中，并将氢氧化钠溶液加热至80℃，用仪器取出小球A置于量杯中，恒温反应2h‑4h，促进小球A中的二氧化硅溶解，形成孔道，得到小球B；步骤五：取出小球B将其放入清水中清洗至洗涤液为中性为止，得到小球C；步骤六：取出小球C放入30%甘油溶液中充分浸泡1h‑2h，得到小球D；步骤七：取一个烤箱调节温度至40℃，取出小球D，置于烤箱中烘干10h‑20h，得到小球E；步骤八：称取1g的小球E，按每克小球E，每5ml的戊二醛溶液的量加入戊二醛溶液修饰表面基团，反应避光进行 2h‑4h，避免戊二醛的自我交联，修饰结束后将小球取出，用清水洗涤5‑10遍，去除多余的戊二醛，获得的小球称为小球F；步骤九：将小球F加入胰蛋白酶液中，在4℃条件下固定2h‑5h，固定完成后用pH=8.0的缓冲液冲洗3‑5次，得到固定化胰蛋白酶。