[发明专利]一种高通量简易细胞O-糖基化位点的富集、鉴定方法有效
申请号: | 201811650406.9 | 申请日: | 2018-12-31 |
公开(公告)号: | CN109738533B | 公开(公告)日: | 2022-06-21 |
发明(设计)人: | 黄江铭;曹纬倩;蒋碧云;杨芃原 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/08;G01N33/68 |
代理公司: | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人: | 陆飞;陆尤 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明属于蛋白质分析技术领域,具体为一种高通量简易细胞O‑糖基化位点的富集、鉴定方法。本发明方法包括:通过在细胞培养环境中加入O‑GalNAc糖链合成抑制剂,使O‑GalNAc糖链合成抑制在单个GalNAc的水平;然后通过超滤辅助凝集素富集技术实现O‑GalNAc糖肽的富集,利用单糖竞争机制释放富集到的O‑糖肽;最后通过LC‑MS,高通量鉴定O‑GalNAc糖基化位点。本发明解决了因为O‑糖链释放酶的缺失和无保守的修饰位点序列等原因带来的O‑GalNAc位点高通量鉴定困难的问题,通过抑制剂简化O‑糖链策略、超滤辅助凝集素亲和富集技术,实现了O‑GalNAc位点的大规模鉴定。 | ||
搜索关键词: | 一种 通量 简易 细胞 糖基化位点 富集 鉴定 方法 | ||
【主权项】:
1.一种高通量简易细胞O‑糖基化位点的富集、鉴定方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)通过在细胞培养环境中加入O‑GalNAc糖链合成抑制剂,使O‑GalNAc糖链合成抑制在单个GalNAc的水平;(2)然后通过超滤辅助凝集素富集技术实现O‑GalNAc糖肽的富集,利用单糖竞争机制释放富集到的O‑糖肽;(3)最后通过LC‑MS,高通量鉴定O‑GalNAc糖基化位点。
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