[发明专利]可变区序列文库构建方法、测序方法及其试剂盒有效
| 申请号： | 201880000622.0 | 申请日： | 2018-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN109415768B | 公开（公告）日： | 2021-11-16 |
| 发明（设计）人： | 许林浩;黄智敏 | 申请（专利权）人： | 广州合谐医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6876 | 分类号： | C12Q1/6876;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 张春水;唐京桥 |
| 地址： | 510000 广东省广州市开发区广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，尤其涉及可变区序列文库构建方法、测序方法及其试剂盒。本发明公开了一种可变区序列文库的构建方法，包括以下步骤：步骤一、获得含有编码可变区的DNA样本；步骤二、以所述DNA样本作为模板，通过第一引物群扩增编码所述可变区的DNA序列，获得第一扩增产物库；步骤三、以所述第一扩增产物库作为模板，通过第二引物群和第一接头的引物扩增编码所述可变区的DNA序列，获得可变区序列组合产物。本发明用于解决目前构建TCR或者BCR的可变区序列文库技术存在的扩增效率低、扩增存在偏倚性以及容易丢失可变区序列文库序列信息的技术缺陷。 | ||
| 搜索关键词： | 可变 序列 文库 构建 方法 及其 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种可变区序列文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、获得含有编码可变区的DNA样本；步骤二、以所述DNA样本作为模板，通过第一引物群延伸编码所述可变区的DNA序列，获得第一扩增产物库，其中，所述第一引物群包括特异性识别J区的所有亚型的编码序列的的第一引物，所述第一引物包括特异性识别J区的编码序列的核苷酸序列、校对随机段和第一接头，且所述特异性识别J区的编码序列的核苷酸序列、所述校对随机段和所述第一接头依次连接，所述第一引物群的校对随机段的序列互不相同；步骤三、以所述第一扩增产物库作为模板，通过第二引物群和第一接头的引物扩增编码所述可变区的DNA序列，获得可变区序列组合产物，其中，所述第二引物群包括特异性识别V区的所有亚型的编码序列的的第二引物；所述第二引物包括特异性识别V区的编码序列的核苷酸序列和第二接头，且所述特异性识别V区的编码序列的核苷酸序列和所述第二接头相互连接；所述第一接头的引物包括特异性识别第一接头的核苷酸序列。
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