[发明专利]通用发夹引物在审
| 申请号： | 201880020455.6 | 申请日： | 2018-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN110446787A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | T·拉孜;P·玛丽 | 申请（专利权）人： | 生物辐射实验室股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/682;C12Q1/6848;C12Q1/6869;C12Q1/6876;C12N15/10 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 余颖;陈扬扬 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明涉及靶核酸扩增的方法及其在测序方法或其他下游应用诸如基因分型或克隆中的用途。更具体地，该方法涉及通过使用通用发夹引物扩增靶核酸的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 发夹 靶核酸扩增 基因分型 引物扩增 通用 靶核酸 测序 引物 克隆 应用 | ||
【主权项】：
1.一种靶核酸扩增的方法，其包括：(1)将第一靶核酸与下述物质混合：(a)第一靶引物对，所述第一靶引物对包含一种或两种第一靶特异性发夹引物，所述发夹引物具有：(i)3’单链靶特异性区，当其处于或低于Tm温度时，和(ii)5’区，其在低于Tm温度时形成发夹而在高于Tm温度时不形成所述发夹，其中所述5’区包含通用衔接子序列，和(b)通用引物对，所述通用引物对包含一种或两种通用发夹引物，所述通用发夹引物：(i)具有所述5’区，并且(ii)没有单链3'端，据在低于Tm温度时所确定；(2)以处于或低于Tm温度的温度将来自所述第一靶引物对的至少一种第一靶特异性发夹引物的3’单链靶特异性区退火至所述第一靶核酸，并用聚合酶以模板依赖性方式延伸所述靶特异性发夹引物，以形成包含一条或两条通用衔接子序列的第一扩增子；(3)将所述第一扩增子变性成两条核酸链；(4)以高于所述Tm温度的温度将所述一种或两种通用发夹引物退火至所述第一扩增子中一条链的通用衔接子序列；(5)用聚合酶以模板依赖性方式延伸所述一种或两种通用发夹引物，以形成第二扩增子，从而扩增所述第一靶核酸。
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