[发明专利]用于多靶标扩增的避免二聚体的多重聚合酶链式反应有效
| 申请号： | 201880030175.3 | 申请日： | 2018-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN110662756B | 公开（公告）日： | 2023-09-15 |
| 发明（设计）人： | 潘文京;米兰达·伯恩-斯蒂尔;侯晓红;布里塔尼·布朗;韩建 | 申请（专利权）人： | 艾瑞普特公司 |
| 主分类号： | C07H21/04 | 分类号： | C07H21/04;C12P19/34;C12Q1/6806;C12Q1/686;C12Q1/6811;G01N30/02 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 高丽娜;张莹 |
| 地址： | 美国阿*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本公开涉及用于扩增核酸的方法，所述方法避免与引物‑二聚体形成相关的问题。本方法在本文中称为避免二聚体的多重聚合酶链式反应(dam‑PCR)。本文公开的所述方法通常包括以下步骤：反转录DNA(例如来自RNA样品的cDNA)的至少一个第一条链，其中DNA的每个第一条链掺入反向共用引物结合位点；选择DNA的每个第一条链；从DNA的至少一个第一条链中的每个中合成DNA的至少一个第二条链，其中DNA的每个第二条链掺入正向共用引物结合位点；选择cDNA的每个第二条链；以及使用共用引物扩增DNA链。或者，所述方法可以使用gDNA模板进行。由于在扩增前DNA链的选择和未使用的引物的去除，本文所述的方法避免引物‑二聚体形成，并与常规的多重PCR方法相比，允许更高的灵敏度和效率。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 靶标 扩增 避免 二聚体 多重 聚合 链式反应 | ||
【主权项】：
1.一种方法，其包括以下步骤：/n使用反向引物混合物从含有至少一种靶序列的mRNA中反转录cDNA的至少一个第一条链，形成至少一个第一条链cDNA；/n其中所述反向引物混合物含有至少一个反向引物，所述反向引物被配置以将反向共用引物结合位点掺入cDNA的每个第一条链中；/n选择每个第一条链cDNA；/n使用正向引物混合物从所述cDNA的至少一个第一条链中的每个中合成cDNA的至少一个第二条链，形成至少一个第一条链：第二条链复合物；/n其中所述正向引物混合物含有至少一个正向引物，每个正向引物被配置以结合特定的cDNA第一条链，并将正向共用引物结合位点掺入cDNA的每个第二条链中；/n选择每个第一条链：第二条链复合物；/n使用与至少一个反向共用引物结合位点结合的反向共用引物并使用与至少一个正向共用引物结合位点结合的正向共用引物扩增cDNA链；和/n选择经扩增的cDNA链。/n
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