[发明专利]单核苷酸检测方法及相关探针在审
| 申请号： | 201880032020.3 | 申请日： | 2018-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110621786A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 巴纳比·巴姆福思;卡梅伦·亚历山大·弗雷林;马克·德特莱夫森 | 申请（专利权）人： | 贝斯4创新公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12Q1/6823 |
| 代理公司： | 11021 中科专利商标代理有限责任公司 | 代理人： | 高丽娜;张国梁 |
| 地址： | 英国*** | 国省代码： | 英国;GB |
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| 摘要： | 对核酸进行测序的方法，其特征在于以下步骤：(1)通过核酸的渐进酶促消化产生单核苷三磷酸流；(2)通过在聚合酶存在下使至少一个单核苷三磷酸与相应的生物探针反应来产生至少一个寡核苷酸使用的探针，所述相应的生物探针包含(a)第一单链寡核苷酸，其包括核酸外切酶封闭位点，位于所述封闭位点5'侧并包括用于捕获该单核苷三磷酸的单核苷酸捕获位点的限制性核酸内切酶识别位点，和位于所述识别位点5'侧并被布置为使荧光团被猝灭的至少一个荧光团区域，和(b)第二和任选的第三单链寡核苷酸，它们分别与第一寡核苷酸分离，并能够与位于捕获位点3'和5'侧翼的第一寡核苷酸上的互补区域杂交；(3)用限制性核酸内切酶在识别位点切割所述经使用的探针的第一寡核苷酸链，以产生带有荧光团的第一寡核苷酸组分；(4)用具有3'‑5'核酸外切活性的酶消化该第一寡核苷酸组分，以产生可检测状态的荧光团，以及(5)检测步骤(4)中释放的荧光团。还提供了与具有5'‑3'核酸外切活性的酶一起使用的相应方法，以及新的生物探针和由其得到的试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 寡核苷酸 荧光团 核酸 位点 生物探针 单核苷 识别位 磷酸 捕获 限制性核酸内切酶 单链寡核苷酸 探针 外切 侧翼 寡核苷酸链 核酸外切酶 可检测状态 单核苷酸 互补区域 聚合酶 酶消化 试剂盒 封闭 测序 渐进 酶促 猝灭 切割 杂交 消化 释放 检测 | ||
【主权项】：
1.对核酸进行测序的方法，其特征在于以下步骤：(1)通过核酸的渐进酶促消化产生单核苷三磷酸的流；(2)通过在聚合酶存在下使至少一个所述单核苷三磷酸与相应的生物探针反应来产生至少一个寡核苷酸使用的探针，所述相应的生物探针包含(a)第一单链寡核苷酸，其包括核酸外切酶封闭位点，位于所述封闭位点5'侧并包括用于捕获所述单核苷三磷酸的单核苷酸捕获位点的限制性核酸内切酶识别位点，和位于所述识别位点5'侧的至少一个荧光团区域，其被布置为使所述荧光团被猝灭，和(b)第二和任选的第三单链寡核苷酸，它们分别与第一寡核苷酸分离，并能够与位于所述捕获位点3'和5'侧翼的第一寡核苷酸上的互补区域杂交；(3)用限制性核酸内切酶在所述识别位点切割所述经使用的探针的第一寡核苷酸链，以产生带有所述荧光团的第一寡核苷酸组分；(4)用具有3'-5'核酸外切活性的酶消化所述第一寡核苷酸组分，以产生可检测状态的荧光团，以及(5)检测步骤(4)中释放的所述荧光团。/n
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