[发明专利]一种FnCpf1介导的体外DNA编辑试剂盒

摘要

本发明提供了一种FnCpf1或其突变体介导的体外DNA编辑试剂盒。本发明将crRNA的转录，酶切连接反应结合在同一反应混合物中，一步实现载体和目的片段的组装。而且获得了具有更广PAM识别范围的FnCpf1突变体，可以识别PAM为60/64(PAM‑NNN)选择可以用于该编辑方案的包括YN,TAA,TAC,TGC,CAA，将FnCpf1的识别范围扩大4倍。由于Cpf1的优势，本发明方法只需要有一种消化酶可以取代目前的各种类型的限制性内切酶并且几乎没有序列依赖性，同时酶切和连接反应一步进行。提供了一个广泛DNA靶向范围的CRISPR体外编辑系统,并可以作为一个有效的一步反应的无缝编辑工具。

主权项

1.一种基于CRISPR/Cpf1系统的体外DNA编辑试剂盒，其特征在于：它含有如下组分：DNA片段1；DNA片段2；RNA，或者CrRNA模板DNA与T7RNA聚合酶；其中：DNA片段1由a、b、c三段串联组成，a、c段分别为CrRNA的识别切割区；b段为待拼接的核酸序列1；CrRNA的识别切割区为PAM位点和长度为23bp的任意序列连接而成；DNA片段2由d、e、f三段串联组成，其中，e段为待拼接的核酸序列2，d、f段分别为CrRNA的识别切割区，d、f剪切后的末端分别与a、c互补；CrRNA模板DNA：由T7启动子、DR、spacer序列组成，DR为19或36nt，spacer序列长度为23nt。